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预染蛋白Mark操作使用方法

更新时间:2018-02-27      点击次数:3051

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EZ Mark彩色预染蛋白质标准(10-180KD)

D1009L1253

250 μL

-20

产品简介

EZ Mark彩色预染蛋白分子量标准包含了从10k到180k共10种高度纯化并预染的重组蛋白质(10, 17, 25, 33, 40, 53, 70, 95, 130, 180k, 均带His标签),其中70kD条带为橙色,10k为绿色,其余条带为蓝色,适合作为SDS-PAGE和Western的蛋白质分子量标准。本彩色预染蛋白质分子量标准已经配制在1×SDS-PAGE上样缓冲液中,直接使用,不要煮沸、稀释,也不需要加入还原剂处理。

根据上样孔的大小,EZ Mark彩色预染蛋白质分子量标准通常每次上样5-10微升(5×1.5mm胶孔5μL足够),即可在电泳时、电泳后和转膜后观察到非常清楚的蛋白条带。

使用方法

1. 室温下解冻后轻轻混匀或者是用移液枪缓慢吹打均匀,不要煮沸。

2. 取本产品5ul与实验样品同时进行聚丙烯酰胺凝胶电泳;

注:用户可以根据目标蛋白浓度、实验条件和实验习惯通过预实验确定合适的上样量,可以节约成本,获得更佳实验图片。

保存条件

冰袋运输,-20℃长期保存,或4℃短期保存。

注意事项

  1. Page胶内孔径随胶度变化,在低浓度胶时,小分子量的蛋白标准迁移速度大于指示剂,会泳动于染料前缘,大小分质量标准间距也相对较小。
  2. 在做Western blot时,大分子量蛋白需要更长的转膜时间或更高转膜的压,蛋白质标准也是如此。
  3. 购置冻干Marker产品的客户,如果需要自己配制冻存液,可参考配方:

储存液:67 mM Tris-H3PO4, pH7.5, 5mM EDTA, 2 % (W/V) SDS, 33 % (V/V) Glycerol, 0.02 % (V/V) proclin300

     4.预染蛋白质因染料与蛋白结合,在不同的缓冲体系下,染料分子所带电荷可能会有不同,因而表现为不同缓冲体系下有不同的表观分子量。EZ Mark彩色预染蛋白质标准在Trisglycine (Tris-甘氨酸体系,zui为常用)和BisTrisMops体系下表观分子量如下图。 如用其他缓冲体系,可事先用非预染蛋白质标准大致确定EZ Mark彩色蛋白质标准的表观分子量。

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