PCR原理及反应步骤
更新时间:2022-07-21 点击次数:2907
PCR的原理:
多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术,是近30多年发展起来的一种体外扩增特异性DNA片段的技术,可在数小时之内对仅有几个拷贝的基因放大千万倍。那么,PCR的原理是怎样的呢?
PCR技术实际上是在模板DNA、引物以及原料(四种脱氧核糖核苷酸)在适宜的反应条件下,通过DNA聚合酶的酶促反应完成DNA扩增的过程。
PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。PCR反应分为三步:
1)变性:通过加热时DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离成单链DNA;
2)退火:当温度突然降低时由于模板分子结构较引物复杂的多,而且反应体系中引物DNA量远大于模板DNA,使引物和其互补的模板在局部形成杂交链,而模板DNA双链之间互补的机会较少;
3)延伸:在DNA聚合酶和四种脱氧核糖核苷酸第五以及Mg2+存在的条件下,5’→3’的聚合酶催化以引物为起点的DNA链延伸反应。
4)3步为一个循环,每一个循环的产物可以作为下一个循环的模板,30个循环左右,介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量的复制,数量可达2×107个拷贝。