PCR原理及反应步骤

　　PCR的原理：
 

　　多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术，是近30多年发展起来的一种体外扩增特异性DNA片段的技术，可在数小时之内对仅有几个拷贝的基因放大千万倍。那么，PCR的原理是怎样的呢？
 

　　PCR技术实际上是在模板DNA、引物以及原料(四种脱氧核糖核苷酸)在适宜的反应条件下，通过DNA聚合酶的酶促反应完成DNA扩增的过程。
 

　　PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。PCR反应分为三步：
 

　　1)变性：通过加热时DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离成单链DNA；
 

　　2)退火：当温度突然降低时由于模板分子结构较引物复杂的多，而且反应体系中引物DNA量远大于模板DNA，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链，而模板DNA双链之间互补的机会较少；
 

　　3)延伸：在DNA聚合酶和四种脱氧核糖核苷酸第五以及Mg2+存在的条件下，5’→3’的聚合酶催化以引物为起点的DNA链延伸反应。
 

　　4)3步为一个循环，每一个循环的产物可以作为下一个循环的模板，30个循环左右，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量的复制，数量可达2×107个拷贝。