原代细胞冻存液的制备、使用与保存

　　原代细胞冻存液的制备和使用对于细胞的保存和复苏具有重要意义。以下是制备和使用原代细胞冻存液的步骤：
 

　　制备：
 

　　准备所需试剂和器材，包括DMSO、FBS、培养基、离心管、移液管、细胞计数板、显微镜等。
 

　　收集细胞样品，加入适量培养基进行洗涤。
 

　　弃去培养基，加入适量DMSO和FBS混合液进行细胞冻存液的制备。
 

　　将细胞冻存液分装到冻存管中，每个冻存管中加入1毫升细胞冻存液，标记好冻存管。
 

　　将冻存管放入梯度冻存盒中，然后保存至-80℃过夜(如果没有冻存盒，可以先在4℃冰箱放置30 min，然后转移至-20℃放置1-2 h，最后转移至-80℃过夜)，第二天取出放入液氮罐，并记录好位置信息。
 

　　使用：
 

　　准备所需器材和试剂，包括细胞冻存液、离心管、移液管、培养基等。
 

　　从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴锅中进行复苏。
 

　　复苏后，将细胞转移至培养基中进行培养。
 

　　保存：
 

　　在复苏后数小时内将细胞传代并培养，以便快速扩增和存储。
 

　　可以将细胞保存在常规培养箱中，但需要注意温度和湿度的控制。
 

　　可以使用细胞冻存盒将细胞保存于-80℃冰箱中，以延长细胞的存活时间。