Bis-Tris蛋白预制胶的使用方法通常包括以下几个步骤,这些步骤可能会因不同的品牌和型号而略有差异,但总体流程大致相同:
一、准备工作
选择合适的预制胶:根据实验需求,选择适当的Bis-Tris蛋白预制胶浓度和规格。
取出预制胶:从包装袋中取出预制胶,并撕去底部的密封胶带(通常为蓝色或透明色)。
固定预制胶:将预制胶固定在电泳槽中,确保胶板与电泳槽的接触面平整,且密封良好以防止漏液。
二、电泳缓冲液准备
准备电泳缓冲液:根据预制胶的说明,准备适量的电泳缓冲液。通常,Bis-Tris蛋白预制胶使用的是MOPS或MES缓冲系统,而非Tris-Glycine等其他电泳缓冲液。
加入电泳缓冲液:向内槽中加入足够的电泳缓冲液,确保浸没点样孔;外槽中的电泳缓冲液应至少没过电泳槽底部的阳极,但不可漫过胶板。
三、上样
处理样品:将蛋白样品与Loading buffer按比例混合均匀,并根据需要进行加热处理(如使蛋白变性)。
加样:使用移液器将处理好的蛋白样品加入预制胶的加样孔中,注意避免枪头戳破凝胶或过度插入梳孔造成漏液。同时,注意每个加样孔的容量限制,以避免溢出。
四、电泳
设置电泳条件:根据预制胶的说明或实验需求,设置合适的电泳电压和时间。通常,Bis-Tris蛋白预制胶的电泳条件为100150V,电泳时间4060分钟。
启动电泳:将电泳槽插上电源线,并将电源线插头插入电泳仪电源插孔。然后,选择合适的电泳条件并启动电泳仪。
观察电泳过程:在电泳过程中,可以观察溴酚蓝指示带的移动情况,以判断电泳的进度和是否需要调整电泳条件。
五、凝胶取出与后续处理
电泳结束:当溴酚蓝指示带电泳至胶板底部或实验预定位置时,结束电泳。
取出凝胶:关闭电泳仪并断开电源后,从电泳槽中取出预制胶。使用撬具或刀片小心插入胶板之间的空隙,撬动胶板上、中、下三个位置,直至胶板完全分离。
凝胶处理:将有凝胶的胶板一侧浸入水中(通常为蒸馏水),贴着水面轻轻提起胶板,使凝胶从胶板上脱落。然后,将凝胶取出进行后续实验,如染色、成像等。
六、注意事项
安全操作:实验过程中应穿实验服并戴一次性手套操作,确保个人安全。
避免污染:在操作过程中,避免电泳缓冲液、样品等化学物质溅入眼睛或皮肤;同时,也要防止这些物质污染实验器材和凝胶。
电泳条件调整:根据实验需求和预制胶的说明,可以适当调整电泳电压和时间以获得最佳实验结果。
凝胶保存:如果凝胶需要保存以备后续使用,应将其浸泡在适当的保存液中,并储存在低温条件下(如4℃)。
遵循以上步骤和注意事项,可以确保Bis-Tris蛋白预制胶的正确使用和实验结果的准确性。