BCA蛋白定量试剂盒检测方法及注意事项

　　BCA蛋白定量试剂盒检测方法：
 

　　1. 试管检测方法(样品:BCA工作液=1:20)
 

　　(1) 各取100 μL 标准品和待测样品加入到反应管中。
 

　　(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液，混匀。根据待测样品的浓度范围选择孵育时间和温度。
 

　　标准孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室温2h(检测范围：20-2000 μg/mL)
 

　　增强孵育方法：60℃ 孵育30 min(检测范围：5-250 μg/mL)
 

　　【注】：BCA 检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应，但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
 

　　(3) 冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为 562 nm，在10 min内对所有样品读数。【注】：由于BCA 反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10 min 内能对所有的样本进行 562 nm 吸光度的测试，不会导致明显错误。
 

　　(4) 根据BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的OD 562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
 

　　2. 微孔板检测方法(样品: BCA工作液=1:20)
 

　　(1) 各取10 μL标准品和待测样品加入到微孔板中。【注】：样品与工作液比例为1:20，检测范围为125-2000 μg/mL。若样品浓度非常低，可使用25μL 标准品和待检测样品进行检测(即1:8)，这时试剂盒的检测范围为 20-2000 μg/mL。
 

　　(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液，枪头吹打充分混匀。盖上微孔板，37℃ 孵育30 min。
 

　　(3) 冷却到室温，在酶标仪上的562 nm 波长范围处检测吸光度。
 

　　(4) 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数)，绘制标准曲线( X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的OD 562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
 

　　BCA蛋白定量试剂盒注意事项：

 

　　本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
 

　　若测定标准曲线时无梯度变化，表明存在BCA法检测干扰物，详细的BCA法干扰物质兼容性表详见官*。