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18616108315
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产品名称 | 货号 | 规格 | 保存 | 价格(元) |
Taq DNA聚合酶(5U/μL) | D1010L1177 | 200 U | -20 ℃ | 80
|
产品描述
本制品是94kDa的耐热性DNA聚合酶，是把Thermus aquaticus DNA Polymerase基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得到的。它与天然Taq DNA聚合酶具有相同的功能。使用本制品扩增得到的PCR产物的3´端附有一个"A"碱基，因此可直接克隆于T载体中。配以Life-iLab*配方的5×反应缓冲液（已添加Mg2+）可获得更加理想的扩增结果。
活性定义
在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。
产品特点
：以入DNA为模板，扩增长度可达8kb，可以扩增≤4kb片段。
灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
高品质：*Real Time PCR的实验要求。
*配方的5×Buffer：使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、。
产品用途
常规PCR鉴定；小片段目标基因克隆；平端PCR产物加A；双脱氧法测序；荧光定量PCR。
使用建议
使用本试剂扩增得到的PCR产物3´ 端有一突出"A"碱基，可直接克隆于T载体中。如需扩增克隆较长片段建议换用Pfu DNA聚合酶。当扩增大片段时，Taq酶的扩增效率大大低于Taq Plus酶，在>4Kb片段的PCR扩增中建议换用Taq Plus酶。
实用实例：
例1: 50μL扩增体系中，以5ngλDNA 为模板，对500bp～6.0kb
的扩增结果。
泳道M：1KB DNA Marker；
泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb；
泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；
泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb；
例2: 50μL扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模
板，可对特定基因片段（380bp）进行很好的扩增。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；
泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；
泳道M：DNA Ladder 2000 Marker
产品包装
组份 | D1010L1177 | D1010L1178 |
Taq DNA 聚合酶(5U/μL) | 50μL | 200μL |
dNTPs混合液(各10mM) | 200μL | 1mL |
5×Taq Buffer with Mg2+ | 2mL | 10mL |
运输和储存
-20℃运输和保存，避免反复冻融，在保存条件下可保存1年。
质量保证
经多次柱纯化，SDS-PAGE检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
常用反应体系 | 常用PCR程序 | |||
5 x Taq Buffer 上游引物 下游引物 dNTPs(个10mM) 模板 Taq DNA聚合酶 ddH2O | 10μL 0.2-1.0μM(终浓度) 0.2-1.0μM(终浓度) 1μL 1-50ng(质粒)/10ng-1μg(基因组) 0.25μL(1.25U) 至50μL | 扩增片段<3k | 扩增片段≥3k | |
94℃ 90s 94℃ 20s 30次循环 57℃ 20s 72℃ 60s/kb 72℃ 5m 4℃ 保温 | 94℃ 30次循环 72℃ 4℃ | 20s 94℃ 5s 68℃ 60s/kb 5min 保温 | ||
注意事项使用方法
1、2mM Mg2+的终浓度可以满足绝大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了保证较好的扩增，可调节为2-4mM。
2、体系中加入推荐的酶量，可以满足大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了得到较好的扩增，可适当增加酶量。
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