Recombinant Enterokinase重组肠激酶使用说明书

文件下载    图片下载    

Recombinant Enterokinase重组肠激酶

订购信息

产品简介

肠激酶（Enterokinase）是一种丝氨酸蛋白酶，高度专一性识别Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列，在Lys的C端水解多肽/融合蛋白，去除融合标签，释放出目的蛋白。但天然肠激酶来源有限，并且从动物组织提取的肠激酶污染有其他蛋白酶，这给实际应用带来了困难。重组肠激酶（rEK）是高纯度的牛肠激酶轻链亚基，它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性，且切割速率更快。重组肠激酶（rEK）被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。

本产品为采用重组酵母分泌表达的高纯度、高活性的牛肠激酶，适用范围广（4～45℃，pH4.5～9.5），并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。因经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带。本制品不含有非特异性的蛋白酶切活性。

技术参数

运输与保存方法

-20℃保存，冰袋运输。质保期12个月

使用方法（参考举例）

1. 反应体系构建，以1000μl为例，反应体系如下：

注：10 x rEK反应缓冲液配方：0.5M Tris-HCl，pH 8.0（22℃），10mM CaCl，1% Tween-20。

2. 酶切反应， 25 °C过夜酶切。

3. （可选）重组肠激酶的去除，后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：

平衡缓冲液：25mM Tris-HCl pH8.0

洗脱缓冲液：25mM Tris-HCl pH8.0，含100mM NaCl

注：① 如果使用纯化柱，注意流速不要太快。确保样品与胶的接触时间不少于10min。也可以直接将胶加入到酶切缓冲液中直接动态吸附30min。② 如酶切缓冲液中含有其他成分，如NaCl，甘油等，会影响吸附效果。

注意事项

1．如果样品溶液中含如下成分的一种或多种，且含量大于所列数值，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到1×反应缓冲液中，然后再进行酶切实验。

>2M Urea，>250mM NaCl，>20mM β-ME，>0.1% SDS，>50mM imidazole。

2）磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。