EZ ECL 增强型化学发光液使用说明书

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EZ ECL 增强型化学发光液

产品描述

《EZ ECL 增强型化学发光液》用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了*的发光底物系统，可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)，极其节省抗体, 可检测低皮克级的蛋白，操作步骤无需进行特别优化。灵敏度高，信号持续时间长达5小时，不但适用于X射线胶片、也可用CCD或激光成像仪成像。

产品组分

运输与保存方法

常温运输。收到货后4℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法

1. 执行常规SDS-PAGE、转膜、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。

注：1) 推荐将一抗浓度稀释到0.5ug/ml（0.05～1ug/ml均可）；

2) 将二抗浓度稀释到0.02ug/mL（0.005～0.04ug/mL均可）。

2. zui后1次洗膜的同时，新鲜配制发光工作液：根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀，备用。

注：1）短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液，但为获得*结果，将此工作液保存在棕色瓶中，避免暴露于任何强光。

2）取A液和B液一定要用不同的枪头，工作液现配现用，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3. 用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液，勿使膜*干燥。用移液器将工作液加到膜上（推荐150μl发光液/cm2膜），使之充分接触。室温孵育5分钟，准备立即压片曝光。

4. 用平头镊子夹起膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不可让膜*干燥。

5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来*包裹印迹膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白条带面向上。

6. 在黑暗中将X感光胶片放置在包裹的保鲜膜上，根据蛋白浓度曝光适当时间（根据光强度需摸索曝光时间，一般30s-2min），显影冲洗。

注：根据经验，如果背景过高，可使用两张X感光胶片同时压片。

注意事项

（1）步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

（2）长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

（3）发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。

（4）由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。

（5）某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。

（6）使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可确定胶片上条带的位置和大小。

（7）NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。