Hoechst 33258 *超级纯*使用说明书

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Hoechst 33258 *超级纯*

产品描述：

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 33258为特异性DNA染料，与A-T键结合，这种染料对死细胞或经70%冷乙醇固定的细胞可立即染色。而活细胞的着色是渐进性的，在10min内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也可以用于普通的细胞核和线粒体的显像观察。

Hoechst经常用来代替其它核酸染料如DAPI，这两种染料关键的不同点在于，与DAPI相比，Hoechst 33258具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜。用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。

技术参数：

光学性质：Ex(nm)：352      Em(nm)：461

化学参数：分子量：533.88   溶剂：Water        CAS：23491-45-4

使用方法：

1.缓冲液制备。用PBS或合适的缓冲液制备10～50µM Hoechst 33258染色液。

2.固定的细胞或组织染色。对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。依次按步骤进行免疫荧光染色，和Hoechst33258染色。如果不进行免疫荧光染色，则直接按步骤进行Hoechst33258染色。

a)对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

b)吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

c)直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

3.活细胞或组织染色

a)细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。

b)在37℃培养细胞10～20分钟。

c)用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d)直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。。

运输与保存方法：

冰袋（wet ice）运输。-20℃干燥避光保存，保质期12个月。

注意事项

1.  Hoechst 33258溶于水，溶解度可达20μM(约10mg/ml)。您也可直接购买20μM的液体规格产品（货号:C5480L1100）。

2.  Hoechst 33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

3.  荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

4. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。