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Alexa Fluor 488 标记鬼笔环肽(绿色)使用说明书

发布时间:2017/11/17      点击次数:7045

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Alexa Fluor 488-Phalloidin, Alexa Fluor488 标记鬼笔环肽

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Alexa Fluor 488 标记鬼笔环肽(绿色)

C6242L0520

300 T

-20℃

1950

 

产品描述

鬼笔环肽是从一种菌类Amanita Dhalloides所提取出来的环肽。它与F-actin竞争性的结合。荧光标记的鬼笔环肽在纳克水平就可与F-actin选择性的结合并且易溶于水,为检测组织切片,培养细胞和无细胞体系中的actin的定位和定量提供了非常方便的标记方法。

本品为Alexa Fluor488标记的鬼笔环肽,可发出高亮度、稳定的绿色荧光,染色反应特异性强,对比性高,适合用作F-actin的定性和定量检测。与Actin抗体比较,Alexa Fluor488 鬼笔环肽具有如下优点:1)与actin亚单位一比一结合,并且不与G-actin结合,具有比Actin抗体更好的染色效果;2)且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛;3)鬼笔环肽标记的非特异性信号可忽略,因而图像的反差较好;4)染色与用于细胞分析的其他荧光染色*兼容,包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他Alexa Fluor偶联物(包含Alexa Fluor偶联二抗);5)经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。

技术资料

1. Ex(nm):493

2. Em(nm):517

3. 分子量:1900

4. 溶剂:DMSO

5. 结构式:

 

运输与保存方法

冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存,1年有效。

使用方法:

1.   准备1000x DMSO Alexa FluorTM 488标记鬼笔环肽存储液

用30µL DMSO 溶解粉末状Alexa FluorTM 488标记鬼笔环肽,可按需分装并于-20℃避光干燥保存,分装保存,避免反复冻融。

2.   准备1x Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽工作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽存储液到1ml 含有1%BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

注意:不同的细胞染色状况不同,相应Alexa Fluor 488鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

3. 细胞染色步骤

1)细胞培养过夜或更长,使其密度达到50-60%汇合度。

2)吸掉培养液,37℃预热的1×PBS(pH 7.4)清洗细胞2次。

3)使用含有3-4%甲醛的PBS溶液进行细胞固定,室温固定10-30min。

注意:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4)室温条件下,用PBS清洗固定好的细胞2~3次,每次10min。

5)(可选):室温条件下,用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5min,从而增加其通透性。

注意:鬼笔环肽的分子量小,很容易通过细胞,一般情况下不需对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。

6)室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

7)每孔加入 Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽工作液100µl/孔(96孔板),室温避光染色20-90min,夏季时间相对短些。

8)用PBS清洗细胞3次,每次5min,去除掉多余的Alexa Fluor 488标记鬼笔环肽。

9)(可选):加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染,如:100µl/孔(96孔板),室温3~5min。用PBS清洗细胞2次,每次5min。

10)于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择Alexa FluorTM 488激发/发射滤片(Ex/Em=493/517nm)和/或DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。

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