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蛋白酶K跟蛋白酶的区别在哪里?

更新时间:2019-04-22      点击次数:2192
  蛋白酶K主要应用于基因检测中基因抽取,是检测试剂盒生产的重要原料,蛋白酶K产品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白质的能力,因而被广泛应用于制备脉冲电泳的染色体DNA,以及去除DNA和RNA中的核酸酶。现有基因抽提及检测试剂盒中均需配备该酶。
  蛋白酶K跟蛋白酶有什么区别:
  蛋白酶K广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面.一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般储存在-20°C,避光防潮密闭干燥。
  蛋白酶是所有能够催化分解蛋白质的酶类的统称,而蛋白酶K则是特指一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的降解,比如在提取DNA时溶解DNA的水中就有一定量的蛋白酶K.所以它们不属于同一个产品。
  蛋白酶K配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinaseK):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
  蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。
  孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
  作用:蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核?的消失,从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。
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