线粒体染色试剂盒的分离原理

　　核线粒体的分离原理:

　　1.通过机械方法破裂细胞。

　　2.通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞。

　　3.通过高速差速离心获得线粒体。

　　使用注意事项：

　　1.全程低温操作，将样品管放在冰水浴而不是碎冰中。

　　2.快速、微量制备比大规模制备操作更方便快捷，因而更容易获得完整的线粒体。

　　3.在不破坏亚细胞器的情况下、破碎细胞是制备线粒体的关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃均浆时较难破壁，因而要选小容量、玻璃均浆器，间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。在相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右。研磨过度将破坏线粒体。研磨不足会降低得率。

　　4.离心力g计算正确的离心速度，不同离心机可依据此计算离心速度。

　　5.进行WesternBlot和2D-胶电泳，可直接加入样品缓冲液裂解线粒体。

　　线粒体染色试剂盒可以标记活细胞中的线粒体，使之带红色荧光(Ex/Em=640/659nm)(Cy5filter)。本试剂盒使用染料为一种疏水性复合物，属线粒体选择性染料，该染料能轻易进入活细胞内，通过线粒体膜电位变化渗透进入线粒体，并在线粒体中富集。线粒体染色试剂盒提供了标记线粒体的全套试剂，能提供蓝色/绿色/红色/橙色等不同荧光供选择，既可单独使用，也支持对细胞的多重荧光分析。这种的细胞标签为从空间上和时间上研究发生的细胞活动提供了一种十分有效的方法。