蛋白酶K的配制标准及保存方法
更新时间:2020-10-22 点击次数:4108
蛋白酶K广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面.一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般储存在-20°C,避光防潮密闭干燥。
蛋白酶K主要应用于基因检测中基因抽取,是检测试剂盒生产的重要原料,蛋白酶K产品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白质的能力,因而被广泛应用于制备脉冲电泳的染色体DNA,以及去除DNA和RNA中的核酸酶。现有基因抽提及检测试剂盒中均需配备该酶。
蛋白酶K配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinaseK):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。
蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。