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双十二｜凋亡检测试剂盒狂欢购！送淘票票乐影卡

更新时间：2023-12-19 点击次数：443

凋亡检测试剂盒 · 介绍

[产品] Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

[货号] AC12L033

[规格] 100T

细胞凋亡简单介绍

细胞凋亡又称程序性细胞死亡，是一种正常的生理过程，这种细胞死亡方式与细胞坏死不同，他不会引起机体的炎症反应。细胞凋亡在机体内受到高度调节，旨在牺牲特定细胞为生物体谋取更多益处，细胞凋亡广泛存在于生长发育和衰老的各个环节中，有时也作为一种防御机制。

细胞凋亡过程中，细胞具有典型的形态学特征：第1阶段中（持续时间很短）细胞的间接触消失，但胞膜尚完整，粗面内质网上的核糖体脱落，细胞核出现固缩；第2阶段中细胞核碎裂后与细胞内的各种细胞器结合，并进一步被质膜包裹形成凋亡小体；第3阶段中吞噬细胞吞噬凋亡小体，将其消化并重新供机体使用。

细胞凋亡信号通路

细胞凋亡的途径主要有两种且相互关联，外源性或死亡受体途径、内在性或线粒体途径。外源性途径涉及跨膜受体介导的相互作用，当细胞表面的死亡受体（FAS受体）被激活，启动半胱天冬酶（Caspase）级联反应，该反应能导致细胞死亡；而内在途径直接在细胞内启动，由线粒体释放促凋亡蛋白（SMAC和细胞色素C），从而激活半胱天冬酶，导致细胞凋亡。

细胞凋亡如何检测（基于生物学功能、生化标记方法）

（1）Annexin V-FITC/PI检测法

磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）为带负电荷的磷脂，位于正常活细胞细胞膜脂质双层的内侧，细胞凋亡早期 PS 发生外翻，暴露于细胞膜外侧。Annexin V(AV)是一种分子量约为36 kDa 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS有高度亲和力，因此利用FITC标记的AV蛋白可以结合细胞膜外侧的PS，用于指示早期凋亡细胞。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种核酸染料，PI 无法通过正常的细胞膜或早期凋亡的细胞膜, 但可以透过凋亡中晚期细胞或者坏死细胞的细胞膜并对细胞核进行染色，用以区分存活的早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞以及坏死细胞。

因此FITC-Annexin V 与PI 双染方法可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开。

（2）JC-1 线粒体膜电位检测

线粒体膜电位降低是细胞早期凋亡的一个标志，当线粒体膜通透性发生改变时，膜电位会降低。JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△ Ψm 的理想荧光探针，在线粒体膜电位较高时，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，产生绿色荧光。

（3）TUNEL检测法

细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解，这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的 DNA 片段约为 180 bp-200 bp 的整数倍，表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状 Ladder 图谱。

TUNEL 法可以选择性的对凋亡细胞直接进行原位检测，而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞，是一种更快速、直接的检测手段。

（4）凋亡相关分子检测法

在半胱天冬酶家族中，Caspase-1、3、7和8主要参与细胞凋亡过程。测量活细胞中的 Caspase 1 活化能够检测细胞凋亡。Caspase-3 具有特异性的底物多肽识别序列，通过 Caspase 3 作用，断裂 Rh 110 多肽，产生具有强烈绿色荧光的 Rh 110。Caspase-8由CASP8基因所编码，已被证明具有底物选择性，通过 Caspas-8 的切割 R110 肽产生强绿色荧光。

（5）DNA染色检测法

Hoechst 33258 和Hoechst 33342是一种低细胞毒性的穿透细胞膜的蓝色荧光染料。Hoechst 33258 为特异性 DNA 染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经70%冷乙醇固定的细胞可立即染色，而活细胞的着色是渐进性的，在 10 min 内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。