高保真聚合酶的特征概述
更新时间:2017-07-20 点击次数:1449
高保真聚合酶的校正作用,与其它在PCR反应中使用的聚合酶相比,Pfu聚合酶有着出色的热稳定性,以及*的“校正作用”。与TaqDNA聚合酶不同,PfuDNA聚合酶具有3'-5'外切酶的即时校正活性,可以即时的识别并切除错配核苷酸。因此,使用PfuDNA聚合酶进行PCR反应,比使用Taq聚合酶有较低的错配突变几率,保真性更高。
高保真聚合酶共性,此酶zui早在大肠杆菌中发现,以后陆续在其他原核生物及微生物中找到。这类酶的共同性质是:[1]以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为前体催化合成DNA;[2]需要模板和引物的存在;[3]不能起始合成新的DNA链;[4]催化dNTP加到生长中的DNA链的3'-OH末端;[5]催化DNA合成的方向是5'→3'。下面首先介绍大肠杆菌的DNA聚合酶,然后简略说明一下其他原核生物的DNA聚合酶和真核生物DNA聚合酶。
高保真聚合酶功能,聚合作用,在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之。