产品简介

CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）可用于细胞增殖测定，细胞毒性的检测，药物筛选，以及细胞生长抑制检测等。

CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）

产品描述

CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度的比色检测试剂盒。检测原理为：WST-8在电子耦合剂1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜（formazan，参考图1)，生成的甲臜的颜色深浅与细胞增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm 波长处测定OD 值，间接反映活细胞数量。

本试剂盒可用于细胞增殖测定，细胞毒性的检测，药物筛选，以及细胞生长抑制检测等。

图1：WST-8分子结构及检测原理

订购信息

运输与保存

蓝冰运输。4℃短期保存，有效期6个月；-20℃长期保存，有效期24个月。【注】：反复冻融会造成测定背景OD值升高。

CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）使用方法

1.       以96孔板为例，96孔板中每孔接种100 μL的细胞悬液，在细胞培养箱预培养24 h。

2.       向每孔加入10 μL不同浓度的待测物质。如果仅测定细胞活性，则不需要2~3步骤，直接从第4步操作。

3.       将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（依据待测药物而定）。

4.       向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要产生气泡，轻轻混匀）。

5.       将培养板在培养箱内孵育适当时间（一般0.5~2 h）。

6.       酶标仪测定450 nm处的吸光值。

细胞活力计算

细胞存活率*（%）=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

抑制率*（%）=[1-(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

As: 实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液)；

Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ；

Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。

注意事项

1.       本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.       建议调试合适的接种细胞的数量和加入CCK-8溶液后培养的时间。当使用标准96 孔板时，贴壁细胞至少1000 个/ 孔(100 μL 培养基)，白细胞至少2500 个/ 孔(100 μL 培养基)。建议实验前设定几个不同细胞数量的梯度孔进行条件测试，细胞培养时间和处理方法根据实验情况而定，加入CCK-8溶液后（加入体积为每孔细胞培养液体积的10%），在37℃细胞培养箱中孵育，不同时间点后测450 nm处的吸光值(CCK-8敏感性高，一些细胞0.5 h后就可以测定第一次)。

3.       CCK-8试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应，如果待检测体系中有较多还原剂（或抗氧化剂）会造成背景OD值升高，干扰检测结果。如果实验中有还原剂，请检查背景的OD值，设法先去除还原剂干扰。例如，可在加入CCK-8溶液之前更换新鲜的培养基，以去除待测药物的影响。当待测药物影响比较小时，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

4.       进行药物抑制实验时，如果药物中含有金属，如Pb2+、Fe2+、Cu2+等金属会对CCK-8 Solution的显色反应产生影响，从而导致检测的灵敏度降低。

5.       如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。细胞培养基酚红不影响测定结果。

6.       为使CCK-8试剂盒培养基充分混匀，减少CCK-8在移液器上的残留，建议加样前用培养基稀释CCK-8试剂，混匀后加样。

7.       若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入0.1 M 的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室温避光保存，24 h 内检测，吸光度不会受到影响（加入1% SDS 溶液的体积与加入CCK-8溶液的体积相同）。

8.       如果吸光值很低，可以适当增加细胞数量或者延长加入CCK-8溶液后孵育的时间。

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