详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
---|---|---|---|
应用领域 | 生物产业,制药 |
Anti-His免疫磁珠将高质量的鼠源单克隆Anti-His抗体共价偶联在超顺磁性纳米微球表面,可特异性地与动植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有 HIS 标签的蛋白结合,从而用于带有 His 标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或纯化。Anti-His Magnetic Beads (Anti-HIS 磁珠),可以特异性地结合 HIS 标签融合蛋白,并可以借助磁力架等磁分离设备非常便捷地应用于带有 HIS 标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀或纯化等实验。
产品优势
1.具有高效的蛋白结合能力。
2.超低非特异性吸附的性能。
3.配合磁力架操作省时、简便、温和。
4.产品稳定性高。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
Anti-His免疫磁珠 | AP62L202 | 1 mL | 1700 |
运输与保存
常温运输。4℃保存,有效期 24 个月。
技术参数
粒径 | 200 nm |
浓度 | 10 mg/mL |
结合力 | ≥ 0.5mg HIS-tagged fusion protein/mL of beads |
适用范围 | IP,CoIP |
使用方法
贴壁细胞样品
1.移去培养基,用 PBS 洗细胞两次。
2.收集细胞至 1.5 mL EP 管内,按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer,同时加入 PMSF 等相应的抑制剂,混匀后置于冰上静置 5-20 min(期间混匀几次)。
3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 离心收集上清液,置于冰上以备后续实验(或置于-80 ℃长期保存)。
表 1.培养皿 IP Lysis/Wash Buffer 推荐使用体积
培养皿大小/表面积 | IP Lysis/Wash Buffer 体积 |
100 mm x 100 mm | 500-1000 µL |
100 mm x 60 mm | 100-300 µL |
6 孔板 | 100-200 µL |
悬浮细胞样品
1.4℃、500-1000 g、10 min,收集细胞,弃上清。
2.用 PBS 洗细胞一次,即用 PBS 将细胞团重悬,4℃、500-1000 g、10 min,收集细胞,弃上清。
3.用预冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重悬细胞。每 50mg 细胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入 PMSF 等相应的抑制剂,混匀后置于冰上静置 5-20 min(期间混匀几次)。
4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 离心收集上清液,置于冰上以备后续实验(或置于-80 ℃长期保存)。
血清样品
一般建议建议用 IP Lysis/Wash Buffer 稀释血清样品至目标蛋白终浓度为 50~150 µg/mL,置于冰上备用(或置于-20 ℃长期保存)。
免疫沉淀
【注】:为保证磁珠均匀分布,使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。
1.将 25µL(0.25 mg)的 Anti-His Magnetic Beads 加入 1.5 mL 离心管中。
2.向磁珠中加入 500 µL 预冷 PBS,轻柔混匀。
3.将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。
4.向离心管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。
5.将制备好含有 GST 标记蛋白加入装有磁珠的离心管中,保持混匀室温下孵育 1-2 h。
6.用磁力架收集磁珠,除去未结合的样品,保存以备分析。
7.向离心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer,轻柔混匀。收集磁珠,弃上清。再重复洗两次。
8.变性洗脱:向离心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer(1×),将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10 min。通过磁力架分离磁珠,保留含有目的抗原的上清。
【注】:如需保持蛋白活性,也可采用以下洗脱方式。
低 pH 洗脱:向离心管中加入 100 µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管 5-10 min。通过磁力分离磁珠,保留含有目的抗原的上清。每 100 µL 洗出液中加入 10 µL Neutralization Buffer 来中和低 pH。
注意事项
1.本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2.请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠,这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3.IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的,抗体与抗原结合还会受到 IP Lysis/WashBuffer 的影响,因此,如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果,可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验,推荐使用李记生物的相关产品,参照相关产品推荐。
4.微球使用前应充分振荡均匀。微球应保存在储存溶液中,防止干燥。
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