产品分类
Product Category详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 货号 | AC04L051、AC04L052 |
---|---|---|---|
规格 | 300uL、1mL | 供货周期 | 现货 |
应用领域 | 化工,生物产业,综合 |
产品描述
EZ Trans siRNA转染试剂,是一种基于阳离子高分子聚合物开发的新型转染试剂,适用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的转染。本产品能在多种常见细胞中实现高效率、低毒性的转染效果,且具有操作简便,重复性佳等优点,适用于 siRNA或miRNA 介导的基因抑制实验。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
EZ Trans siRNA转染试剂 | AC04L051 | 300 uL |
EZ Trans siRNA转染试剂 | AC04L052 | 1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。4℃保存,有效期 6个月;-30℃至-10℃保存,有效期12个月。注:避免反复冻融。
使用方法(以 24 孔板为例,其他培养皿中转染请参考表 1)
1. 接种细胞
对于贴壁细胞:转染前一天,将细胞按照每孔1-2x10^5个细胞的量进行铺板,使其在转染时密度为60%-80% 为佳。
对于悬浮细胞:转染当天,配制转染试剂-核酸复合物之前,用PBS清洗细胞1-2次,用250 μL Opti-MEM I 减血清培养基 (无血清) 重悬细胞,在24孔板中进行细胞铺板,细胞密度为60-80%。
2. 准备转染试剂-siRNA复合物(或转染试剂-miRNA复合物)
(1) 对于每孔细胞,取2 μLsiRNA (20 μM,DEPC水溶解)加入到1.5mL离心管中,加入2 μL转染试剂与siRNA 混合,室温孵育3 min。
(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I减血清培养基(无血清),轻轻混匀,在室温下静置30 min,形成转染试剂-核酸复合物。
(3) 30 min后,往上述复合物中加入250 μLOpti-MEM I减血清培养基(无血清),轻轻混匀。
3. 转染细胞
(1) 细胞用PBS清洗1-2次,将上述350µL转染试剂-siRNA复合物加入每孔细胞。
(2) 在 37℃,5% CO2 培养箱培养 24-48 h,无需更换新的培养液,之后即可检测基因干扰效果或者后续功能实验。可在转染 12h 后补充 150μL 培养基 (含血清),总体积达到 500μL,即达到常规的培养皿使用培养液的量。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 小RNA(siRNA/miRNA)质量:请务必使用高纯度无内毒素转染级RNA。
3. 整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料,如离心管、枪头、缓冲液。
4. 细胞条件:细胞状态会极大影响转染效率,待转染细胞应处于良好生长状态,建议使用生长处于指数期、存活率大于90% 的细胞进行转染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。
5. 细胞培养液要求:EZ Trans 细胞转染试剂可用于有血清培养基的转染,并且转染前后不需要换培养基。
6. 由于某些特殊培养基中的成分可能会抑制阳离子聚合物介导的转染,因此建议测试这些培养基与本产品的相容性,以确保最佳转染效果。
7. 细胞类型、基因特性、siRNA/miRNA的效力、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素都会影响siRNA/miRNA介导的基因敲低效果。
8. 建议siRNA/miRNA工作浓度在10-100nM之间,转染试剂的体积应根据siRNA/miRNA浓度和培养皿的大小进行调整,请参见表1。
表 1:不同培养体积对应的待转siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀释液用量
培养器皿 | 培养液体积 (mL) | RNA (20 μM ) (μL) | 转染试剂 (μL) | Opti-MEM I培养基a (μL) | Opti-MEM I培养基b (μL) |
96 孔板 | 0.1 | 0.4 | 0.4 | 20 | 50 |
24 孔板 | 0.5 | 2 | 2 | 100 | 250 |
12 孔板 | 1 | 4 | 4 | 200 | 500 |
6 孔板 | 2 | 8 | 8 | 400 | 1000 |
60 mm 培养皿 | 4 | 16 | 16 | 800 | 2000 |
100 mm 培养皿 | 10 | 40 | 40 | 2000 | 5000 |
注:该表使用量仅供参考,具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。a: 稀释转染试剂-RNA复合物所需培养基的量;b: 加入转染试剂-RNA复合物的培养基的量。
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本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
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