EZ Trans一站式慢病毒包装试剂盒

产品描述

李记生物EZ Trans一站式慢病毒感染试剂盒（EZ Trans Lentiviral Infection Kit）包含：慢病毒包装质粒复合物、对照质粒、转染试剂（EZ Trans Regent）、慢病毒浓缩液、慢病毒感染增强剂等必要组份，可一站式高效完成病毒包装到感染细胞的全部过程。李记生物慢病毒包装试剂盒（Lentiviral Infection Kit）提供足量、优质的对照质粒和包装质粒，省去实验人员抽提质粒的工作可快速包装病毒感染细胞。

李记生物慢病毒载体表达系统由pLenti慢病毒载体和Lentiviral Mix质粒组成。pLenti慢载体中含有HIV基本元件5’LTR和3’LTR以及WPRE等其他辅助元件，表达框为U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro，含绿色荧光和puro真核抗性。Lentiviral Mix能够表达病毒包装需要的各种必需原件，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包装系统。

订购信息

产品组分

运输与保存

蓝冰运输。A、B、D组分-20℃保存，C、E组分4℃保存，有效期12个月。

使用方法

一、慢病毒包装及纯化浓缩（以10 cm培养皿为例，1皿为1T）

1.        细胞准备：293T细胞按照6×10⁵cells/mL的细胞密度传代到10cm培养皿中，第二天细胞长到80%-85%时准备转染。

2.        转染前换液：转染前1h将需要转染的细胞更换新鲜的DMEM，10mL/皿。

3.        转染：

(1)      取1.5ml EP管记为质粒混合液（管A），加入500μL DMEM，16μL质粒DNA（可自行构建）和22μL包装质粒复合物（浓度为1μg/μL），振荡混匀；

(2)      另取1.5mL EP管记为转染试剂混合液（管B），加入500μL DMEM，90μL 转染试剂，振荡混匀。

(3)      再将管B缓慢加入到管A中，轻轻混匀，静置8min形成复合物，后将混合液均匀滴加到提前换好液的10cm培养皿中，轻轻混匀，放入培养箱中培养。

4.        转染后换液：转染后6-8h，将培养皿中的培养基吸掉，弃于废液杯中，然后加入10mL 完*培养基（含有血清和抗生素）继续培养。

5.        病毒收集：转染48h后，吸取上清液于50mL 离心管中，4000rpm离心10min, 4℃，将上清液用0.45μm过滤器过滤转移到新的50mL 离心管中。此时上清液中的病毒颗粒可以直接去检测滴度或者感染目的细胞，如果对病毒的滴度及纯度有较高要求，可进行后续操作。

6.        病毒浓缩：每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒浓缩液（CAT:AC04L442），混匀，4℃放置2h，4000rpm离心30min，吸弃上清。

7.        检测及分装：包装好的病毒可以直接检测滴度，待用的病毒用EZ病毒保护液重悬分装冻存。

二、慢病毒感染细胞（以293T细胞为例，MOI值为1）

1.         细胞铺板：

(1)      将293T细胞配成5×10⁴cells/mL细胞悬液，待铺板。

(2)      将上述细胞悬液接种到6孔板，每孔铺2mL，即1×10⁵cells/well。

2.         感染慢病毒：

(1)      铺好板细胞培养12-20h，准备感染。

(2)      加病毒，计算方法：(细胞数×MOI值/病毒原液滴度)×10³=病毒量(μL)，加病毒量见下表。

(3)      加感染增强剂：感染增强剂工作浓度 1mg/mL，储存液浓度 100mg/mL，使用EZ 增强剂与培养基体积按1:100比例稀释使用。EZ 增强剂加入后轻摇使其分散均匀。

(4)      换液：感染8-12h弃去培养基，每孔加入2mL 新鲜培养基。

3.         观察：72h后观察细胞状态，根据情况做开展后续实验。（可选）

注意事项

1.         本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.         所有慢病毒操作均应尽量在BSL2级生物安全柜中进行，并佩戴一次性医用口罩和手套。

3.         病毒切忌反复冻融，冻融一次病毒滴度降低10%-20%左右。

4.         病毒储存6个月后，建议在使用前重新测定病毒滴度。

5.         提高转染效率, 一些特殊细胞不能加入感染增强剂。

6.         病毒添加量与待感染细胞MOI值、病毒滴度、目的基因产物对细胞毒性有关，病毒添加量计算方法满足大多数实验需要，实验人员可在此基础上摸索最佳病毒添加量。