柱式动物组织/细胞总蛋白抽提试剂盒

产品描述
本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法，能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞，有效提取总蛋白，包括离心管柱和经过优化的细胞裂解液。与传统的 RIPA 裂解液相比，本试剂盒可以提取出更多的蛋白，避免在细胞裂解过程中由于 DNA 沉淀和不溶性细胞碎片导致的部分蛋白丢失。采用过柱纯化技术，最小可处理 20 μL 样本与裂解液混合物，最大可达 500 μL。提供变性和非变性两种细胞裂解液，用户可根据后续的实验需求选取不同的裂解液。【注】：变性裂解液可用于 SDS-PAGE，Western-blotting， ELISA 分析；非变性裂解液可用于 IP，Co-IP，enzymeassays 等分析。
订购信息

产品组分

运输与保存
常温运输。常温保存，有效期12个月。【注】：研磨棒可重复使用。
使用方法
细胞样品
一、 样品裂解
变性液提取
1. 去除细胞培养液，用预冷的PBS 洗涤两次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果
细胞密度过高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。
2. 用枪吹打数下，转移裂解液至离心管柱中。【注】：少量没有裂解的细胞不影响最终蛋白提取的质量。
3. 14,000 rpm 离心1 min。
4. 收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑
制剂防止蛋白降解。
非变性液提取
1. 去除细胞培养液，用预冷的 PBS 洗涤两次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果
细胞密度过高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。
2. 用枪吹打数下，冰上放置10min后转移裂解液至离心管柱中。
3. 14,000 rpm 离心1 min。
4. 收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑
制剂防止蛋白降解。
二、悬浮细胞
变性液提取
1. 收集细胞0.5~2×107
于1.5mL离心管中，1mL预冷的PBS洗涤两次，1,000xg 离心3min，弃上清，重复三次。
2. 根据细胞沉淀体积加入同体积的预冷PBS重悬细胞后，根据细胞量加入对应量的变性裂解液。【注】：表中为推荐
用量；PBS不可多加，只要能使细胞重悬即可。

3. 剧烈震荡15s后，转移裂解液于离心管柱中。【注】：少量没有裂解的细胞不影响最终蛋白提取的质量。
4. 14,000 rpm 离心1min（如果裂解液过于粘稠可增加离心时间）。
5. 收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑
制剂防止蛋白降解。
非变性液提取
1. 收集细胞0.5~2×107
于1.5mL离心管中，1mL预冷的PBS洗涤两次，1,000xg 离心3min，弃上清，重复三次。
2. 根据细胞量加入对应量的非变性裂解液。【注】：表中为推荐用量。
细胞沉淀体积（uL） 加入裂解液体积（uL）

3. 剧烈震荡15s后，冰上孵育10min。
4. 转移裂解液于离心管柱中。
5. 14,000 rpm 离心1min
6. 收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑
制剂防止蛋白降解。
3、组织样品
变性液提取
1. 把组织jian切成小碎片。
2. 加入适当裂解液，一般100mg 组织加入1mL 裂解液。【注】：如果裂解不充分可适当增加裂解液。
3. 用研磨棒在1.5mL离心管中研磨组织或者用玻璃匀浆器，直至充分裂解。【注】：如果是心肌，皮肤等不易研磨的
组织应使用匀浆器匀浆。
4. 转移裂解液于离心管柱中。
5. 14,000 rmp 离心1min（如果裂解液过于粘稠可增加离心时间）。
6. 收集离心管底的裂解液即为全蛋白提取液。【注】：如果组织样品非常小，可剪切后直接加入裂解液并剧烈vortex
裂解。
非变性液提取
1. 组织jian切成小碎片。
2. 加入适当裂解液，一般100mg 组织加入1ml 裂解液。【注】：如果裂解不充分可适当增加裂解液。
3. 用研磨棒研磨组织匀浆器匀浆，直至充分裂解。冰上放置10min。【注】：如果是心肌，皮肤等不易研磨的组织应
使用匀浆器匀浆。
4. 转移裂解液于离心管柱中。
5. 14,000 rmp 离心1min。
6. 收集离心管底的裂解液即为全蛋白提取液。【注】：如果组织样品非常小，可剪切后直接加入裂解液并剧烈vortex
裂解。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 本产品不含蛋白酶抑制剂，使用中应加入 蛋白酶抑制剂混合物(100×, 不含EDTA)(货号: AP02L084) 防止蛋白降解。
3. 本产品不兼容Bradford法测蛋白浓度，请使用 BCA蛋白定量试剂盒（货号： AP12L025）。