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当前位置:首页 > 产品中心 > 细胞生物学 > 细胞转染 > AC04L061、AC04L062EZ Trans mRNA转染试剂

EZ Trans mRNA转染试剂

简要描述:EZ Trans mRNA转染试剂是一种结合了阳离子聚合物和脂质体优点的转染试剂,协同促进转染复合物进入细胞,随后在胞质中释放,能够在多种细胞类型中实现高效、低毒的转染效果。

  • 产品型号:AC04L061、AC04L062
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2025-02-09
  • 访  问  量:698

详细介绍

品牌Life-iLab/李记生物货号AC04L061、AC04L062
规格300uL、1mL供货周期现货
应用领域生物产业

产品描述

信使核糖核酸(mRNA)在细胞质中启动蛋白质翻译,不需要进入细胞核,可实现比DNA转染更快的蛋白表达,且避免基因整合风险。

EZ Trans mRNA转染试剂是一种结合了阳离子聚合物和脂质体优点的转染试剂,协同促进转染复合物进入细胞,随后在胞质中释放,能够在多种细胞类型中实现高效、低毒的转染效果。

订购信息

产品名称

货号

规格

EZ Trans mRNA转染试剂

AC04L061

300 uL

EZ Trans mRNA转染试剂

AC04L062

1 mL

运输与保存

蓝冰运输。4℃保存,有效期 6 个月;-30℃至-10℃保存,有效期12个月。注:避免反复冻融。

使用方法(以 24 孔板为例,其他培养皿中转染请参考表 1)

1. 接种细胞

对于贴壁细胞:转染前一天,将细胞按照每孔1-2x10^5个细胞的量进行铺板,使其在转染时密度为60%-80% 为佳。

对于悬浮细胞:转染当天,配制转染试剂-核酸复合物之前,用PBS清洗细胞1-2次,用250 μL Opti-MEM I 减血清培养基 (无血清) 重悬细胞,在24孔板中进行细胞铺板,细胞密度为60-80%。

2. 准备转染试剂-mRNA复合物

(1)  对于每孔细胞,将 0.5 μg待转染mRNA加入到1.5mL离心管中,加入2 μL转染试剂与mRNA 混合,室温孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I减血清培养基(无血清),轻轻混匀,在室温下静置30 min,形成转染试剂-核酸复合物。

(3)  30 min后,往上述复合物中加入250 μL Opti-MEM I减血清培养基(无血清),轻轻混匀。

3. 转染细胞

(1)  细胞用PBS清洗1-2次,将上述350µL转染试剂-mRNA复合物加入每孔细胞。

(2)  在 37℃,5% CO2 培养箱培养12 h,无需更换新的培养液,之后即可检测转染效果。若需更长时间转染,可在转染12 h后补充500 μL培养基 (含血清),总体积达到 500μL,即达到常规的培养皿使用培养液的量,12-36 h后再进行检测。

注意事项

1.    本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.    mRNA质量:请务必使用高纯度、无菌、无污染、无内毒素的优质mRNA。可以通过对mRNA进行加帽(相比于Cap0结构,带有Cap1 结构的mRNA对于哺乳动物系统更适合),使用N1-甲基-假尿苷修饰和添加poly(A)尾,以增强mRNA的稳定性和寿命。

3.    整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料,如离心管、枪头、缓冲液。

4.    细胞条件:细胞状态会极大影响转染效率,待转染细胞应处于良好生长状态,建议使用生长处于指数期、存活率大于90% 的细胞进行转染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

5.    细胞培养液要求:EZ Trans mRNA转染试剂转染实验要求采用无血清转染体系(推荐使用Opti-MEM减血清培养基),因为血清会影响复合物的形成及mRNA转染效率。

6.    由于某些特殊培养基中的成分可能会抑制阳离子聚合物介导的转染,因此建议测试这些培养基与本产品的相容性,以确保最佳转染效果。

7.    试剂用量的优化:RNA 浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响,初次使用应优化mRNA 浓度和转染试剂用量以得到最大的转染效率。通常情况下,24孔板的推荐mRNA用量为0.2-1 μg,转染试剂推荐用量为2-4 μL。建议初次使用时,可在推荐范围内进行不同用量的预实验,以优化转染效果。

表 1:不同培养体积对应的待转mRNA、 EZ Trans、稀释液用量

培养器皿

培养液体积

(mL)

mRNA 量

(μg )

转染试剂

(μL)

Opti-MEM I培养基a

(μL)

Opti-MEM I培养基b

(μL)

96 孔板

0.1

0.1

0.4

20

50

24 孔板

0.5

0.5

2

100

250

12 孔板

1

1

4

200

500

6 孔板

2

2

8

400

1000

60 mm 培养皿

4

4

16

800

2000

100 mm 培养皿

10

10

40

2000

5000

注:该表使用量仅供参考,具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。a: 稀释转染试剂-mRNA复合物所需培养基的量;b: 加入转染试剂-mRNA复合物的培养基的量。

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本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。




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