Bradford蛋白定量试剂盒

产品描述

Bradford 法蛋白定量是基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。

订购信息

产品组分

运输与保存

蓝冰运输。组分A在4℃保存，组分B在-20℃保存，有效期12个月。

使用方法

方案一、试管检测

1.试剂准备

(1)     取适量5mg/mL蛋白标准，PBS稀释至终浓度为2mg/mL蛋白标准。配制后可立即使用，也可以 -20℃ 长期保存。

(2)     稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

表1：BSA标准品配制表

(3)     取干净的试管，将30μL稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。

(4)     取干净的试管，分别加入30μL待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个样品做2-3 个平行反应。

2.样品孵育及检测

(1)     向上一步骤配制的不同浓度的标准品BSA和待测样品试管中各加入1.5 mL Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，室温放置10 min。

(2)     用分光光度计测定595 nm 处的吸光值。

3.制作标准曲线和计算样品浓度

(1)     利用Excel或其他软件绘制标准曲线，并计算样品中的蛋白浓度。

(2)     如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

方案二 微孔检测

1.试剂准备

1.1 取适量5mg/mL蛋白标准，PBS稀释至终浓度为2mg/ml蛋白标准。配制后就能使用，也可-20°C长期保存。

1.2 将按表2稀释好的BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各5μL分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个样品做2-3 个平行反应。

表2：BSA标准品配制表

2.样品孵育及检测

(1)     每孔加入250μL Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10 min。

(2)     用酶标仪测定595 nm处的吸光值。

3.制作标准曲线和计算样品浓度

(1)     绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

(2)     如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

注意事项

1.     本产品科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.     样品中若含有去垢剂会影响检测结果，请试用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒。

3.     要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线。

4.     需准备 37℃ 水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 465-595nm 之间，595nm最佳。酶标仪需与 96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。

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