总RNA提取试剂（trizol）

产品描述

总 RNA 提取试剂 （trizol）（下文简称“trizol"）的主要成分是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞，使细胞RNA释放出来，同时保护RNA的完整性，因此，常用于动植物细胞RNA的提取。

订购信息

运输与保存

常温运输。4℃避光保存，有效期12个月。

使用方法

1.       准备样品

l  组织样品：液氮研磨组织法，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次后，按组织样品质量与trizol体积按照50~100 mg/mL加入，匀浆。【注】：组织体积不能超过trizol体积的10%， 否则匀浆效果不好，用电动匀浆器匀浆约需1~2 min 。

l  细胞：培养贴壁细胞不须消化，可直接用trizol进行消化及裂解，trizol体积按10 cm²/mL比例加入；悬浮细胞可直接收集，消化裂解，每1 mL trizol可裂解 5×10⁶动物、植物或酵母细胞，或1×10⁷细菌细胞。

2.       细胞或组织加trizol后，室温放置5 min,使其充分裂解。【注】：此时可放入﹣70℃ 长期保持。

3.       12,000g离心5 min,弃沉淀。

4.       按200 μL氯仿/mL trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15 min。【注】：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。

5.       4℃ 12,000g离心15 min 。

6.       吸取上层水相，至另一离心管中。【注】：千万不要吸取中间界面:若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃ 冰箱，若只提RNA,则弃下层酚相。

7.       0.5mL异丙醇/mL trizol加入异丙醇混匀，室温放置5~10 min 。

8.       4℃ 12,000g离心10 min, 弃上清，RNA沉于管底。

9.       按1 mL 75%乙醇/mL trizol加入75% 乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。

10.   4℃ 8,000g 离心5 min, 尽量弃上清液。

11.   室温晾干或真空干燥5~10 min。【注】：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

12.   可用50 μL H₂O、TE buffer或0.5% SDS溶解RNA样品，55~60℃ ,5~10 min。【注】：H₂O、TE buffer或0.5% SDS均须用DEPC处理并高压。

注意事项

1.       本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.       操作人员应经过专门培训，严格遵守操作规程。

3.       操作处置应在具备局部通风或全面通风换气设施的场所进行。

4.       避免眼和皮肤的接触，避免吸入蒸汽。

5.       远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。

6.       整个提RNA过程需要无RNase的实验用具。

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