Quick Cell支原体基因组DNA提取试剂盒

产品描述

Quick Cell 支原体基因组 DNA 提取试剂盒专为高效提取支原体基因组DNA而设计，其操作流程和试剂配方均针对支原体的生物学特性进行了优化，适用于多种样本类型，包括：细胞、细胞上清、血清、 血浆、全血、生物制品等。提取的 DNA 可直接用于 Quick Cell 系列支原体检测试剂盒（恒温快速法、PCR法、探针法）。其核心作用在于：去除样品中潜在的 PCR 抑制剂或显色干扰物，并浓缩支原体DNA，显著提升检测灵敏度达10-100倍。

订购信息

产品组分

【注】：需自备的试剂和耗材：（1）无水乙醇，约 65 mL；（2）1.5 mL 离心管。

运输与保存

常温运输。组分A在-20℃保存，其他室温或4˚C保存，有效期36个月。

使用方法

1.     实验前准备

(1)  Wash Buffer GW1/GW2：第一次使用前，按标签说明加入无水乙醇，并在瓶上做好标记。

(2)  Buffer GL：使用前检查是否有结晶或沉淀。如有，请于 56˚C 水浴溶解。

2.     样本处理

(1)  待测样品的选择：本试剂盒优选体外培养的细胞上清（贴壁细胞直接取细胞培养上清）、血清、血浆、溶液型生物制品作为提取支原体基因组 DNA 的样品。如果是粉末型样品，需用水溶解后，再进行后续操作。

悬浮细胞： 可经 1200 rpm (约 150 g) 离心 5 min（【注】：离心力过大可能去除支原体），取上清。若细胞量少（< 500 万个），也可直接取培养物。

抗凝全血： 可经 1200 rpm (约 150 g) 离心 5 min（【注】：离心力过大可能去除支原体），取血浆；或直接取 200 μL 全血。

非抗凝全血： 凝固后取血清。

(2)  取上述细胞上清、血清、血浆、生物制品等样品 200 μL，用移液枪吹吸均匀后，进行后续操作。

3.     向以上溶液中加入 20 μL Proteinase K（20 mg/mL）溶液，混匀。

4.     加入 200 μL Buffer GL，混匀。【注】：不要将 Proteinase K 和 Buffer GL 进行预混，否则 Proteinase K 可能失活。

5.     将离心管放置 56˚C 水浴，孵育 15 min。

6.     （选做）加入 10 μL 支原体 qPCR 内参质粒 mycoIC2。【注1】：内参质粒 mycoIC2 只在本公司Quick Cell 探针法支原体检测试剂盒内含有，如果使用其他支原体检测方法，本步骤可以跳过！【注2】：加入的内参质粒 mycoIC2 用于监控支原体 DNA 的提取和后续支原体 qPCR 的扩增是否有效。

7.     加入 200 μL 无水乙醇，上下颠倒混匀数次。1000 rpm（约 100 g）低速短暂离心（20 Sec），使管壁和壁盖上的液体集中到管底。

8.     将全部溶液加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM）中。12,000 rpm 离心 1 min，弃废液，吸附柱放回收集管。

9.     向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW1, 盖上盖子，快速颠倒一次（目的：清洗管壁和盖子），12,000 rpm 离心 1 min，弃废液，吸附柱放回收集管。

10. 向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW2，快速颠倒一次，12,000 rpm 离心 1 min，弃废液，吸附柱放回收集管。

11. 再次清洗：向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2，盖上盖子，快速颠倒一次，12,000 rpm 离心 1 min，弃废液，吸附柱放回收集管。

12. 继续 12,000 rpm 离心 2 min。注：离心后，在亮光下检查吸附膜上方塑料垫圈四周是否有液体残留。如有残留，将有残留侧置于离心力内侧，12,000 rpm 再离心 1 min。

13. 弃收集管，将吸附柱置于新的 1.5 mL 离心管中。打开盖子，50-65℃烘箱放置 ≥15 min（或 37℃培养箱/室温放置 ≥30 min），确保乙醇挥发完（避免影响后续酶反应）。

14. 向吸附柱中间部位悬空加入50 μL Elution Buffer EB，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 1 min，收集 DNA 溶液，-20℃保存。

【注1】：本 Elution Buffer EB 已优化，与本公司所有支原体检测试剂盒兼容。使用其他品牌洗脱液时，加大 DNA 加样量（如从 2 μL 增至 20 μL）可能影响扩增效率。

【注2】：如果样品的初始体积分别是 200 μL、1 mL 或 5 mL，经最后 50 μL 洗脱，则支原体 DNA 分别大约浓缩了 4 倍、20 倍或 100 倍，支原体检测的相对灵敏度也大约提高了 4 倍、20 倍或 100 倍。

注意事项

1.       本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.       必须确保使用的移液枪本身没有残留的支原体，尽量用新购移液器、新开封的枪头操作。整个操作过程，佩戴口罩，不要开口说话。

3.       如待测样品是低温保存的血浆、血清、脐带血、胰酶、抗生素、未使用的培养液等，这类样品中支原体含量较低，为了保证支原体DNA的检出率，可通过离心浓缩提高样品DNA浓度，再进行检测。离心浓缩方法：取1 mL样品于1.5 mL离心管中，13000 rpm（约16000 g）离心5min，弃去800 μL上清，剩余200 μL混匀。

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