SYBR Color qPCR Mix

产品描述

Taq Visual SYBR qPCR Premix (Universal) 是SYBR Green I嵌合染料法专用qPCR 试剂，为2× 预混液，包含除引物和DNA 样品以外的所有qPCR 组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA 聚合酶，配合精心优化的Buffer 体系以及PCR 反应促进因子，特异性强、扩增效率高，可有效抑制非特异性扩增，对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR 结果。本品已含有通用校正染料，与绝大多数qPCR 设备兼容，不需要额外添加染料来校正仪器。

本品可利用不同染料混合后产生的变色效应，追踪移液过程，从而显著减少移液错误。Taq Visual SYBR qPCR Premix 中包含蓝色染料，10× Dilution Buffer 中包含黄色染料。当Taq Visual SYBR qPCR Premix（蓝色）中加入了用Dilution Buffer 稀释的模板（黄色）后会产生蓝色→ 绿色的变色效应，从而可以根据液体颜色准确判断是否已加入模板。

订购信息

产品组分

运输与保存

蓝冰运输。短期4℃避光保存，有效期1个月；长期-20℃避光保存，有效期24个月。【注】：避免反复冻融。

使用方法

1.     模板稀释

使用过程中，如需要进行移液追踪，则根据下表选择合适的方式提前添加Dilution Buffer 至模板中，然后进行qPCR 检测；如不需要进行移液追踪，则不使用Dilution Buffer 即可。

【注】：如果Dilution Buffer 使用不当，有可能影响qPCR 结果。

2.     建议的qPCR 反应体系

（a）通常推荐的引物终浓度为0.2 μM，可在0.1~1 μM 范围内调整；

（b）如使用Dilution Buffer 进行加样追踪，模板体积请勿超出2~5 μl/20 μl reaction。如果模板用量低于2 μl/20 μl reaction，会造成显色偏淡，影响追踪效果；如果模板用量高于5 μl/20 μl reaction，Dilution Buffer 中的成分可能会干扰qPCR 反应。不同种类DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的DNA 模板添加量。【注】：当模板类型为未稀释cDNA 原液时，不论其是否包含1× Dilution Buffer，使用体积均不应超过qPCR 反应总体积的1/10，即2 μl/20 μl reaction。

3.     qPCR 反应程序（可根据机型适当调整）

（1）两步法流程：

（a）根据引物的Tm 值进行退火& 延伸（退火）温度的设定；若扩增片段在200bp 以内，退火& 延伸（延伸）时间可以设置为15 s；此外，退火& 延伸（延伸）时间的设置还需根据您使用的qPCR 仪所需要的最短数据采集时间自行调整。

4.     实验优化

① 引物浓度调整

当引物终浓度在0.1~1.0 μM 范围之间变化时，引物浓度越低，扩增特异性越高，但扩增效率会有所下降。

② 扩增程序优化

需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。

5.     引物设计原则

① 扩增产物长度建议控制在80~200 bp；

② 引物长度为18~25 bp；

③ 两条Tm 值相差不超过1℃，Tm 值控制在58~62℃；

④ 引物的GC 含量控制在40%~60%；

⑤ 引物A、G、C、T 整体分布尽量要均匀，避开T/C 或者A/G 的连续结构（特别是3' 端），3' 端最后一个碱基最好为G 或者C；

⑥ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列；

⑦ 使用NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。

注意事项

1.     本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

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