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高保真DNA聚合酶的操作方法介绍
2023-03-09 高保真DNA聚合酶是一种具有高准确性和高速度的酶，广泛应用于PCR扩增、突变筛选、基因克隆、DNA测序等领域。其在基因工程和生物技术研究中有着十分重要的作用。作用原理：高保真DNA聚合酶可将DNA单链合成DNA双链，并对DNA进行扩增。该酶的作用机理基于DNA聚合酶基本的催化反应机制：利用DNA单链为模板，在DNA聚合酶的作用下，引物与模板互补结合进行DNA聚合反应。高保真DNA聚合酶的主要特点是：具有一定的3’-5’外切活性，能修正因PCR扩增引入的多种误差，如插入、缺失、...
DNA聚合酶和RNA聚合酶的异同点
2023-02-22 DNA聚合酶是细胞复制DNA的重要作用酶，目前为止已发现有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ，都与DNA链的延长有关。DNA聚合酶RNA聚合酶的相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。DNA聚合酶RNA聚合酶的不同点：1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP；DNA聚合酶底物是dNTP。2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶没有，当需要解开双链的...
细胞冻存和细胞冻存步骤
2023-01-16 细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而细胞冻存步骤及细胞冻存液的选择也是影响细胞冻存效率及解冻复苏后细胞活力的主要条件。下面就以细胞冻存液为例讲解细胞冻存原理及细胞冻存的步骤。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使...
慢病毒的感染效率受哪些因素影响？
2023-01-06 慢病毒是一种有包膜的RNA病毒，直径为80-120nm，呈二十面体对称结构、球形。病毒颗粒最外层是包膜(包膜蛋白决定了感染细胞的类型)，再往里依次为基质蛋白和衣壳，最里面是两条相同的正股RNA链和酶(逆转录酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的显著特点是感染个体在出现典型的临床症状之前，大多经历长达数年的潜伏期，之后缓慢发病，因此这些病原体被称为慢病毒。慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的慢病毒载体所需要的所...
细胞转染是将外源性基因导入细胞内的一种技术
2022-12-31 细胞转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮...
溶酶体是细胞内的消化器官
2022-12-21 溶酶体（Lysosomes）是动物细胞中重要的细胞器,其存在的完整性与动物生理病理均密切相关。溶酶体是真核细胞中为单层膜所包围的细胞质结构，内部pH4～5，含丰富的水解酶，具有细胞内的消化功能。新形成的初级溶酶体经过与多种其他结构反复融合，形成具有多种形态的有膜小泡，并对包裹在其中的分子进行消化。因此，溶酶体具有溶解或消化的功能，为细胞内的消化器官。溶酶体染色试剂盒可以标记活细胞中的溶酶体，使之带绿色荧光(Ex/Em=405/505nm)。本试剂盒使用染料为一种疏水性复合物，...
RNA的提取方法总结
2022-12-09 这篇文章主要讲的是几种常用的RNA提取方法。1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，经过起始密度为1.78g/ml的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。使用这种方法，不但能得到高质量的RNA，而且能同时分离出细胞染色体DNA.本法对于冷冻时间长、细胞质和细胞核不易分离的组织标本以及富含RNA酶的组织细胞(如胰腺)的RNA提取尤其适合。此法提取的RNA的质量好和成功率高，已成为提取哺乳动物细...
转染试剂用于提高基因实验的效率
2022-11-30 转染是一种将外来颗粒和核酸转移到细胞中的技术，它可以通过化学的方式来实现。转染试剂用于提高基因实验的效率，从而可以在应用基因和基因组令人难以置信的功能领域进行大量研究。在所有转染实验中，转染方式的选择尤为重要。阳离子聚合物与带负电荷的核酸序列结合，带正电荷的复合物被细胞膜吸引并通过内吞作用整合到宿主细胞中。此类试剂包括PLGA（聚乳酸-乙醇酸共聚物），一种可安全用于转染程序的食品级聚合物，以及PBAE（聚-β-氨基酯），一种能够保护DNA分子的聚合物在宿主细胞内递送。这些从P...

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