揭开高保真DNA聚合酶的神秘面纱
更新时间:2018-06-22 点击次数:1514
高保真DNA聚合酶*的扩增能力,简单模板可扩增20 kb,复杂模板可轻松扩增10 kb。*的灵敏度,模板亲和力强,极微量的模板也可扩增。风一样的扩增速度:延伸时间极短,扩增速度可达15 sec/kb。广泛的模板适应性:适用于基因组DNA和cDNA等复杂模板的扩增。通过定向改造,拥有高保真的特性,可以扩增长达15Kb的DNA片段,适用于超长序列的扩增,同时具有高灵敏度、高产量的优势。通过“直接进化”技术,定向改造了种类十分丰富的适用于多种不同实验目的的生物酶,各有特点,可以满足不同的客户需求,且Kapa的系列产品可以适用于市场上现有的各类PCR/Real-time PCR仪器。
高保真DNA聚合酶的不同点,作用底物不同,高保真DNA聚合酶底物是NTP高保真DNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。高保真DNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶没有,当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性,还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对,所以复制的忠实性高于转录的。可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之。
高保真DNA聚合酶在PCR中扮演中至关重要的作用,从某种意义来讲PCR技术就是耐热聚合酶的技术。生物医药领域所使用的大部分是野生型的DNA 聚合酶,如大家熟悉的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶等天然形式存在的酶。因为酶分子自身的结构和功能都有限制,随着研究人员实验要求的提升和生物样本复杂性的提高,野生型DNA聚合酶的局限性也逐渐凸显出来,如扩增效率低,特异性差,高AT或GC含量样本扩增结果差,样本中或PCR 系统中有些抑制剂对反应有干扰等等。