蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶
更新时间:2022-03-21 点击次数:1677
蛋白酶,顾名思义,降解蛋白的酶,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,用于生物样品中蛋白质的一般降解。在RNA提取中,蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶,防止RNA的降解。
蛋白酶K广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面。一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶,具有很高的比活性。一般储存在-20°C,避光防潮密闭干燥蛋白酶是所有能够催化分解蛋白质的酶类的统称
蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去Ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酶制品的蛋白质。所以,蛋白酶k消化过程中通常加入edta(以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入egt(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合Ca2+。