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基因组DNA提取原理说明

更新时间:2022-03-24      点击次数:3101
  DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象。所以基因组DNA提取实验是分子生物学最基本实验之一。 今天若重介绍基因组DNA提取的原理。在接下来的时间了还会介绍动物基因组DNA的提取步骤。
 
  DNA. RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离酸易溶于水,RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L. DNA在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。
 
  在酸性溶液中,DNA天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA时,先把DNP抽提出来,再把P除去,再除去细胞中的糖,RNA及无机离子等,从中分离DNA。DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受 盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中,几乎不溶解,如在0.14 mol/L的氣化钠溶解度低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1molL氯化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小,在0.14mo/ 氯化钠中溶解度较大。因此,在提取时,常用此法分离这两种核蛋白。
 
  苯酚氨仿作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态,真核细胞DNA的分离通常是在EDTA及SDS-类去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞获得。
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