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影响细胞转染效率的因素有哪些?

更新时间:2022-08-19      点击次数:892
  细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。
  影响细胞转染效率的因素有哪些?
  1.转染试剂的选择
  不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。
  每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择适合实验设计的转染试剂。当然,适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。
  2.细胞状态
  一般低的细胞代数(<50)能确保基因型不变。适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞,细胞生长旺盛,最容易转染。
  细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变,总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。也就是说同一种系的细胞株,在各实验室不同培养条件下,其生物学性状发生不同程度的改变,导致其转染特性也发生变化。
  因此,如果发现转染效率降低,可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复结果。
  3.转染方法
  转染时应根据具体转染试剂推荐的方法进行,但也要根据实验室的条件来确定转染条件。
  (1)细胞培养物
  推荐在转染前24小时分细胞,这将提供正常细胞代谢,增加对外源DNA摄入的可能。一定要避免细菌,支原体或真菌的污染。
  (2)细胞密度
  细胞密度对转染效率有一定的影响。如果选用新的细胞系或者新的转染试剂,最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法,包括适当的接种量和培养时间等等。
  (3)血清
  对于主流的转染试剂来说,血清的存在不会影响转染效率,甚至还有助于提高转染效率。
  不过要特别注意:对于RNA转染,如何消除血清中潜在的RNase污染是值得关注的。
  胎牛血清经常用到,便宜一点的有马或牛血清。通常的,血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物,对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响细胞生长,因此也会影响转染效率。新加培养基的预热对细胞转染很有帮助。
  (4)氮磷(N/P)比
  N/P比是转染效率的关键(为了换算方便,一般以DNA/转染试剂质量比表示),在一定比例范围内转染效率随N/P比成比例增高,之后达到平值,但毒性也随之而增加,因此在实验之前应根据推荐比例,确定本实验的最佳转染比例。
  (5)DNA质量
  DNA质量对转染效率影响非常大。应尽可能提高DNA的纯度。
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