您好!欢迎访问和元李记(上海)生物技术有限公司网站!
咨询热线

18616108315

当前位置:首页 > 技术文章 > 活性氧ROS检测原理及检测步骤

活性氧ROS检测原理及检测步骤

更新时间:2024-08-09      点击次数:620

ROS也叫活性氧(reactive oxygen species)是细胞内产生的一种具有氧化活性的化学物质,包括过氧化氢、超氧阴离子等。ROS在正常生理条件下也会产生,但当其产生过多或清除不足时,会对细胞造成氧化应激,导致细胞损伤和疾病发生。

检测原理

用于检测细胞内ROS广泛采用的方法是DCFH-DA荧光探针法。DCFH-DA(二氯荧光黄双乙酸盐)是一种可指示的探针,其本身不具有荧光,但可以自由穿过细胞膜。一旦进入细胞,它会被细胞内的酯酶水解成DCFH。由于DCFH无法穿过细胞膜,因此荧光探针会在细胞内积聚。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH,生成有荧光的DCF,且荧光强度与ROS水平成正比。通过荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等设备,在最大激发波长480nm和最大发射波长525nm下检测荧光

检测步骤

一、装载探针

刺激时间较短(通常为2 h以内)的细胞:先装载探针,后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。

刺激时间较长(通常为6 h以上)的细胞:先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞,后装载探针。

1、原位装载探针(仅适用于贴壁细胞)

活性氧ROS检测原理及检测步骤

2、收集细胞后装载探针(适用于贴壁细胞和悬浮细胞)

活性氧ROS检测原理及检测步骤

二、检测

原位装载探针法:激光共聚焦显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。

收集细胞后装载探针:用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。

注意事项

① 探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。

② 探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否

良好。

③ 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。

④ 根据结果显示的整体荧光强度的高低,可以适当调整DCFH-DA探针的稀释倍数以及孵育时间。


微信咨询
地址:上海市浦东新区紫萍路908弄 传真:021-50724961
©2025 和元李记(上海)生物技术有限公司 版权所有 All Rights Reserved.  备案号:沪ICP备2023007219号-1