D-荧光素钾盐使用说明书

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D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素钾盐*（超纯）

产品描述

D-Luciferin Free acid, potassium salt, and sodium salt *UltraPure Grade*D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

产品性质

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，保质期12个月。

使用方法

1．体外生物发光检测

1）用蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成100 mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

2）用预热好的组织培养基1:200稀释储存液，配制工作液（终浓度150µg/ml）。

3）去除培养细胞的培养基直至无残留。

4）待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。

2．    活体成像分析

1）用无菌的DPBS（w/o Mg2+）配制D-荧光素钾盐工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

 2） 注射量取决于注射方式，具体如下：

3） 注射入体内10-20 min（待光信号达到zui强稳定平台期），再进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定zui高信号检测时间和信号平台期。

 注意事项

1) 本品（firefly luciferin）和甲虫荧光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，仅仅是不同公司在命名上的差异。

2) 本品保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。如果有条件，对储存液充氮气或氩气（防止氧化），稳定性和保存时间更长，长达1年。

3) 注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定*信号平台期和*的检测时间。

4) 荧光素钾盐和荧光素钠盐应用上没有差别，两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看，钾盐的使用率远高于钠盐，尤其是体内实验。两者功效相同。

5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1、 荧光素可以用于动物活体吗？

答：我们许多客户用荧光素作用于动物活体，目前世界上合成荧光素主要有两大生产商，因此目前您使用的就是这两种生产商其中之一生产的。请注意：Promega出售的荧光素是Beetle Luciferin，而我们公司出售的是Firefly Luciferin，但这两种的结构是相同的（结构式如下）。

2、 怎么溶解荧光素？溶解后怎样使它稳定？

答：许多客户已经告诉我们荧光素溶于水中，然后分装好保存于-80℃，不会有重大的影响。然而，关于溶解后荧光素的稳定性也有相矛盾的报道。对于大多敏感的实验，为了减少一些实验中的可变因素我们强烈建议您现配现用（比如低浓度的酶或者不合适的反应温度或不合适的盐浓度等等可能需要高浓度的底物来驱使反应的完成。）