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2 x Taq PCR Master Mix 使用说明书

发布时间:2017/11/14      点击次数:4073

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2 x Taq PCR Master Mix

产品名称

货号

规格

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价格(元)

2 x Taq PCR Master Mix

D1101L1146

1 mL

-20℃

200

产品简介

× Taq PCR Master Mix是即用型的常规PCR预混合溶液,含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及优化的缓冲体系,它以2×的浓度形式存在,反应时只需加入所需引物和模板,用水稀释即可立刻配制完PCR体系。本产品中含有PCR产物具有3’-dA突出端,可轻松克隆至T载体。

运输与保存方法
冰袋运输。收到产品后放到-20 ºC保存,有效期12月以上。

使用方法

1.  反应体系配制(50μl):

模板DNA

optional

引物1(10 μM)

μL

引物2(10 μM)

μL

2× PCR Master Mix (With Dye)

25μL

ddH2O

up to 50μL

注:针对不同模板的*反应浓度有所不同,下表为50μl反应体系推荐模板使用量,仅供参考。

人基因组DNA

0.1~1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10~100 ng

λDNA

0.5~5 ng

质粒DNA

0.1~10 ng

2.  PCR循环反应条件

94

5 min(预变性)

94

30 sec

35个循环

55℃*

30 sec    

72

30 sec

72

7 min(*延伸)

注:退火温度需要根据引物的Tm值调整,一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。

注意事项
1.由于Taq DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性,PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增,有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1 引物3’端zui后一个碱基选择C或G,端zui后8个碱基应避免出现连续错配;端尽量避免发卡结构的出现;
2.2 引物Tm值控制在55℃-65℃之间;
2.3 引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;

2.4 引物GC含量控制在40%-60%之间;
2.5 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

 

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