线粒体染色试剂盒的相关知识普及
更新时间:2018-08-23 点击次数:1226
利用
线粒体染色试剂盒检测线粒体中ROS的水平,严格按照说明书进行操作,各组分别取100μL线粒体,加入等体积10 mol/L H2DCFDA室温孵育30 min,利用酶标仪检测通过490 nm(A490)吸光值表示ROS的含量。线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性测试盒检测HT22细胞线粒体复合物Ⅰ和Ⅳ活性按照前述方法分组和提取线粒体,采用试剂盒检测线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅳ活性。
以细胞质染色呈棕黄色或黄色为阳性,染色结果采用Image-pro6.0图像分析软件进行分析,高倍镜(×400)下每张切片随机选择5个视野,测定吸光度值(A值)并取其平均值作为该切片的A值。Omi/HtrA2的胞内转位间接免疫荧光双染色法,在激光共聚集显微镜下观察。取制备好的10μm厚的冷冻切片,采用免疫组织化学法,严格按免疫组织化学试剂盒和线粒体染色试剂盒说明书操作。线粒体的染色为绿色荧光,Omi/HtrA2的染色为红色荧光,分别用绿色及红色通道扫描,后合成。以胞质中线粒体绿色荧光与Omi/HtrA2红色荧光重叠合成黄色为阴性细胞,代表Omi/HtrA2尚未发生胞内转位。反之,胞质中红色荧光与绿色荧光未发生重叠而相互分离为阳性细胞,代表Omi/HtrA2已经发生胞内转位,随机取多个视野计数共200个细胞中的阳性细胞,以其比例做统计分析。统计学处理采用SPSS 17.0软件对其行单因素方差分析,结果用x珋±s表示,组间比较采用LSD法,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1肺组织形态结构变化对照组早产鼠1 d、3 d、7 d肺组织未见病理改变,肺泡结构逐渐发育成熟。高氧组早产鼠高氧暴露1 d时,与对照组比较差异无统计学意义,高氧暴露3 d时,逐渐出现肺泡壁毛细血管充血扩张,肺泡腔及间质内有少量炎性渗出,高氧暴露7d时,肺损伤较严重,肺泡腔和间质内大量炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡数目减少,且结构简单化和囊泡化,间质内胶原样物质增生,部分肺组织可见肺泡萎缩和肺不张。与高氧组相比,二氮嗪组肺组织受损得到改善。