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DNA电泳套装的基本技术

更新时间:2017-11-06      点击次数:971
  DNA电泳套装电压和温度,电泳时电场强度不应该超过20V/cm,电泳温度应该低于30℃,对于巨大的DNA电泳,温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高,可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象.DNA样品的纯度和状态,注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐,用酚可以去除蛋白。注意变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失,也可能出现不规则的DNA条带迁移。在上样前不要对DNA样品加热,用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。
 
  DNA电泳套装方法,一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带.凝胶浓度,对于琼脂糖凝胶电泳,浓度通常在0.5~2%之间,低浓度的用来进行大片段核酸的电泳,高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎,小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨,造成条带缺失现象。
 
  DNA电泳套装是基因工程中zui基本的技术,DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离,重组子的酶切鉴定等都需要电泳完成。根据分离DNA大小及类型的不同,DNA电泳可分为以下两种,聚丙烯酰胺凝胶电泳   适合分离1kb以下的片段,zui高分辨率可达1bp,也用于分离寡核苷酸,在引物的纯化中也常用此种方法进行纯化,也称PAGE纯.琼脂糖凝胶电泳,可分离的DNA片段大小因凝胶浓度不同而异,胶浓度为0.5~0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp~50kb.电泳结果用溴化乙锭(EB)染色后可直接在紫外下观察.并且可观察的DNA条带浓度为纳克级,而且整个过程一般1小时即可完成,由于该方法操作简单快捷,在基因工程中较为常用.
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