详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 货号 | AN54L029 |
---|---|---|---|
规格 | 1ML | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25 pg/m | 应用领域 | 化工,生物产业 |
PikoGreen dsDNA quantitation reagent是一种极为灵敏的双链DNA荧光染料,仅与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25 pg/mL的dsDNA。与传统DNA定量方法相比,具有灵敏度高,特异性强,耐受性好,线性范围宽及方便操作等优点,适用于cDNA文库构建、DNA亚克隆、PCR产物等领域的DNA浓度的精确测定。相比传统的方法,Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势:
灵敏:数量级较UV吸光读数更敏感,可节省样品。
特异性强:只结合dsDNA,特异性强,不受样品常规污染影响。传统紫外吸光法容易受样品中存在的单链DNA,蛋白,RNA等影响。
耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
线性范围宽:PikoGreen dsDNA染料测定DNA浓度,在100pg/ml-100ng/ml范围内呈良好线性;荧光计兼容。
容易使用:在样品中加入染料,等待5~6 min染色,然后读数即可,且适用于96和384孔板。与大多数基于荧光的酶标仪和可适用于各种DNA样品分析、PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
该分析在四个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。该方法因其稳定性、灵敏性,已经录入《中国药典》。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
PikoGreen dsDNA quantitation reagent(优于PicoGreen) | AN54L029 | 1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。-20℃避光保存,有效期24个月。
使用方法
1. PikoGreen工作液的配制
使用前将PikoGreen dsDNA定量试剂回温至室温;PikoGreen以100 µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的(共10管)。实验当天,根据实验需求用1×TE按1:200 的比例稀释适量定量试剂浓缩液。例如要准备足够的操作溶液以2 mL检测体系测定20个样品,可向19.9 mL 1×TE 中加入100 µL PikoGreen dsDNA 定量试剂。工作液见光易降解,尽量在配好后几小时内使用。
2. 配制标准品DNA溶液
(1)用1 X TE溶液溶解dsDNA制备1 μg/mL dsDNA 。根据在1 cm 光程长度的比色杯中A260 nm时的吸光度确定DNA 浓度;相应于1 μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。标准液常用小牛胸腺DNA制备,PikoGreen 试剂测定法在通常污染核酸*剂的几种复合物存在的条件下仍能保持线性良好,但是,为了得到有效的对照处理,被用来做标准曲线的dsDNA 溶液要用和实验样品相同的方式来处理,并且应该包含相同的可能存在的污染物。
(2)制备从0.5 ng/mL 到500ng/mL(见表1)单重复8 个点的标准曲线。配制一系列的标准DNA 溶液,然后与等体积的PikoGreen 工作液混和,放入1 x 1cm 比色杯中。混合相同体积的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作为空白对照,避光于室温下放置2~5 min。
表1: 用1 x 1cm 比色杯时DNA 标准浓度配制参考
标准DNA 溶液浓度(ng/mL) | 标准DNA 溶液体积(mL) | PikoGreen 工作液体积(mL) | 标准DNA 终浓度(ng/mL) |
1000 | 1 | 1 | 500 |
200 | 1 | 1 | 100 |
50 | 1 | 1 | 25 |
20 | 1 | 1 | 10 |
5 | 1 | 1 | 2.5 |
2 | 1 | 1 | 1 |
1 | 1 | 1 | 0.5 |
0 | 1 | 1 | 空白 |
(3) 当用微量检测皿适配器时,PikoGreen 测定也可在较低的测定体积(50 μL 到200 μL)内完成。产生从1 ng/mL 到100 ng/mL(见表2)的标准曲线,配制一系列的标准DNA 溶液,然后与等体积的PikoGreen 工作液混和,将至少50 μL 溶液转移到微量检测皿中。确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部经常可以驱散气泡。避光于室温下放置2-5 min。
表2:用微量检测皿DNA 标准浓配制参考
标准DNA 溶液浓度(ng/mL) | 标准DNA 溶液体积(mL) | PikoGreen 工作液体积(mL) | 标准DNA 终浓度(ng/mL) |
200 | 30 | 30 | 100 |
50 | 30 | 30 | 25 |
20 | 30 | 30 | 10 |
5 | 30 | 30 | 2.5 |
2 | 30 | 30 | 1 |
0 | 30 | 30 | 空白 |
(4) 孵育后用合适的荧光计测量样品荧光值。Ex/Em=480 nm/520 nm,为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。用荧光值最大的样品校正仪器。
(5)用检测数据与DNA标准溶液浓度做回归分析,制作标准曲线。
3. 样品分析
(1)用1 x TE 稀释待测DNA 样品至需要的体积(1x1 cm 比色杯需1.0 mL,微量检测皿需25~100 μL)。对样品高度稀释可以确保任何污染物都被最大限度地冲淡。然而,也要避免取样体积太小而无法精确吸取的情况。
(2)在每个样品中加入等体积PikoGreen 工作液,混合好,将混合物移入合适的比色杯,避光于室温下放置2~5 min。
(3)检测、读取荧光值,换算样品中dsDNA浓度。可以对样品进行不同的稀释处理重复测定以确保结果的准确性。
注意事项
本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
PikoGreen定量试剂含有DMSO,PikoGreen 是结合dsDNA,操作时采取适当防护,戴手套小心操作。
尽管常见污染物不会影响PikoGreen 检测dsDNA浓度(见表3),但是当样品中dsDNA浓度太低,RNA, ssDNA浓度超过dsDNA 10倍以上时,RNA, ssDNA等污染还是会对检测结果产生较大干扰,在此种情况下,RNA 酶可以消除RNA干扰, RNA 酶A、酶T1 、核酸酶S1 结合能除去ssDNA干扰,从而保证样品荧光值是由dsDNA 产生。
表3:Pikogreen定量耐受的污染物列表
物质名称 | 最大耐受浓度 | 信号变化百分比 |
Salts | ||
Ammonium acetate | 50 mM | 3% decrease |
Sodium acetate | 30 mM | 3% increase |
Sodium chloride | 200 mM | 30% decrease |
Zinc chloride | 5 mM | 8% decrease |
Magnesium chloride | 50 mM | 33% decrease |
Urea | 2 M | 9% increase |
Organic Solvents | ||
Phenol | 0.1% | 13% increase |
Ethanol | 10% | 12% increase |
Chloroform | 2% | 14% increase |
Detergents | ||
Sodium dodecyl sulfate | 0.01% | 1% decrease |
Triton X-100 | 0.1% | 7% increase |
Proteins | ||
Bovine serum albumin | 2% | 16% decrease |
IgG | 0.1% | 19% increase |
Other Compounds | ||
Polyethylene glycol | 2% | 8% increase |
Agarose | 0.1% | 4% increase |
相关产品推荐
2 x qPCR Mix(Green)(货号:AN11L918)
EZ ECL 化学发光液(增强型)(货号:AP34L014)
产品咨询
电话
微信咨询
关注公众号