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品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
---|---|---|---|
分子式 | / | 纯度 | / |
分子量 | / | 货号 | AP01L065 |
规格 | 100ml | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 通过阴离子去垢剂SDS促进细胞膜的崩解。 | 应用领域 | 生物产业 |
产品描述
SDS细胞裂解液(带抑制剂)是一种比较强烈的细胞组织裂解液,通过阴离子去垢剂SDS促进细胞膜的崩解,特别适用于膜蛋白或者细胞骨架蛋白等难溶蛋白的溶解,有利于膜蛋白,胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。本产品具有有强烈的蛋白变性作用,不能用于非变性蛋白方面的研究。本产品裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、染色质免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation,ChIP)等。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
SDS细胞裂解液(带抑制剂) | AP01L065 | 100 mL | 228 |
产品组分
产品编号 | 产品组成 | 包装规格 |
AP01L065 | SDS细胞裂解液 | 100 mL |
磷酸酶抑制剂 | 2*1 mL | |
PMSF | 1 mL | |
产品说明书 | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保质期一年。
使用方法
1. 对于培养细胞样品
对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后,细胞就会被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10 min。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。具体SDS细胞裂解液的使用量参照表1.
(3) 充分裂解后,10000~14000rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 对于组织样品:
(1) 把组织*切成细小的碎片。
(2) 融解SDS细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的终浓度为1mM。
(3) 按照每20毫克组织加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。具体SDS细胞裂解液的用量参照表1。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
注意事项
表1 :SDS细胞裂解液的使用量
样品种类 | 样品来源 | 收获细胞数 | RIPA用量 | 可制备样品数 |
细胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
60 mm培养板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
90 mm培养板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
25 cm2培养瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
75 cm2培养瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
组织 | 20 mg组织块 | 150-250 μL | 400-600 |
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