NP40裂解液（带抑制剂）

产品描述
　　NP40裂解液（带抑制剂）是一种比较温和的细胞组织裂解液，主要成分为50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制。对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用，有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于常规的Western、IP和co-IP等实验蛋白样品的制备。
订购信息

产品组分

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保质期一年。
使用方法

对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混匀，充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。具体NP-40裂解液的使用量参照表1。

2. 对于组织样品
(1) 把组织*切成细小的碎片；
(2) 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的终浓度为1mM。
(3) 按照每20 mg组织加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项

然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

相关试剂推荐
EZ ECL化学发光液（货号：AP34L024）
BCA蛋白定量试剂盒（货号：AP12L025）