详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 货号 | AB11L124 |
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供货周期 | 现货 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业,制药 |
潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (Cat:AB11L234),Zeocin(Cat:AB11L251)和Blasticidin S(Cat:AB11L221)联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入yin病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
潮霉素B (Hygromycin B) | AB11L124 | 1 g |
运输与保存
常温运输。4℃保存,有效期48个月。
技术参数
1.CAS:31282-04-9
2.溶解性:100mg/ml in Water
3.纯度:≥90%
4.酶活/效价:≥950U/mg
5.结构式:
使用方法
1.常用筛选浓度
【注】:潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2.杀灭曲线的建立
【注】:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素zui低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
(1)第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
(2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
终浓度(μg/mL) | 培养基体积(ml) | 5mg/ml潮霉素B加入体积(ml) |
50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
(3)第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
(4)接下来每3-4 d更换新的含药物培养基。
(5)按照固定的周期(如每2 d)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10 d)内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
(3)稳定转染细胞的筛选
(1)转染48 h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
【注】:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果好。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,将细胞稀释至丰度不超过25%。
(2)每隔3-4 d更换含有药物的筛选培养液。
(3)筛选7 d后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
(4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7 d。
(5)之后更换正常培养基培养即可。
注意事项
1.本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2.潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
3.本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5.以上数据均来自公开文献, 李记生物暂未本产品进行独立验证, 仅供参考。
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