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当前位置:首页 > 产品中心 > 生化试剂 > 常见抗生素 > AB11L124潮霉素B (Hygromycin B)

潮霉素B (Hygromycin B)

简要描述:潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

  • 产品型号:AB11L124
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-08-07
  • 访  问  量:1448

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详细介绍

品牌其他品牌货号AB11L124
供货周期现货应用领域医疗卫生,生物产业,制药

潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (Cat:AB11L234),Zeocin(Cat:AB11L251)和Blasticidin S(Cat:AB11L221)联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入yin病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

订购信息

产品名称

货号

规格

潮霉素B (Hygromycin B)

AB11L124

1 g


运输与保存

常温运输。4℃保存,有效期48个月

技术参数

1.CAS:31282-04-9

2.溶解性:100mg/ml in Water

3.纯度:≥90%

4.酶活/效价:≥950U/mg

5.结构式:

使用方法

1.常用筛选浓度

【注】:潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2.杀灭曲线的建立

【注】:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素zui低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。

(1)第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。

(2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)

培养基体积(ml)

5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)

50

9.9

0.1

100

9.8

0.2

250

9.5

0.5

500

9.0

1.0

750

8.5

1.5

1000

8.0

2.0




(3)第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

(4)接下来每3-4 d更换新的含药物培养基。

(5)按照固定的周期(如每2 d)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10 d)内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

(3)稳定转染细胞的筛选

(1)转染48 h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。

【注】:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果好。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,将细胞稀释至丰度不超过25%。

(2)每隔3-4 d更换含有药物的筛选培养液。

(3)筛选7 d后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。

(4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7 d。

(5)之后更换正常培养基培养即可。

注意事项

1.本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

3.本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。

4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.以上数据均来自公开文献, 李记生物暂未本产品进行独立验证, 仅供参考。



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