Anti-Flag免疫磁珠

Anti-Flag免疫磁珠将高质量的鼠源单克隆Anti-Flag抗体共价偶联在超顺磁性纳米微球表面,可特异性地与动植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有 Flag 标签的蛋白结合，从而用于带有 Flag 标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或纯化。Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag 磁珠)，也被称为 Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads，可以特异性地结合 Flag 标签融合蛋白，并可以借助磁力架等磁分离设备非常便捷地应用于带有 Flag 标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀或纯化等实验。

产品优势

1.具有高效的蛋白结合能力。

2.超低非特异性吸附的性能。

3.配合磁力架操作省时、简便、温和。

4.产品稳定性高。

订购信息

运输与保存

常温运输。4℃保存，有效期 24 个月。

技术参数

使用方法

贴壁细胞样品

1.移去培养基，用 PBS 洗细胞两次。

2.收集细胞至 1.5 mL EP 管内，按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer，同时加入 PMSF 等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置 5-20 min（期间混匀几次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80 ℃长期保存）。

表 1.培养皿 IP Lysis/Wash Buffer 推荐使用体积

悬浮细胞样品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集细胞，弃上清。

2.用 PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000 g、10 min，收集细胞，弃上清。

3.用预冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重悬细胞。每 50mg 细胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入 PMSF 等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置 5-20 min（期间混匀几次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80 ℃长期保存）。

血清样品

一般建议建议用 IP Lysis/Wash Buffer 稀释血清样品至目标蛋白终浓度为 50~150 µg/mL，置于冰上备用（或置于-20 ℃长期保存）。

免疫复合物的制备

【注】：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体-抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。

以下实验方案针对 2-10μg 亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。

1.在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与 2-10μg 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500-1500μg。

2.用 IP Lysis/Wash Buffer 将抗体以及制备好的样品稀释至 300-500μL。

3.在室温下孵育 1-2 h，或 4 ℃过夜，以形成免疫复合物。

免疫沉淀

【注】：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。

1.将 25µL(0.25 mg)的 Anti-Flag Magnetic Beads 加入 1.5 mL 离心管中。

2.向磁珠中加入 500 µL 预冷 PBS，轻柔混匀。

3.将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。

4.向离心管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。

5.将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育 1-2 h。

6.用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。

7.向离心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。

8.变性洗脱：向离心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。

【注】：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。

低 pH 洗脱：向离心管中加入 100 µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管 5-10 min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每 100 µL 洗出液中加入 20 µL Neutralization Buffer 来中和低 pH。

注意事项

1.本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3.IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到 IP Lysis/Wash Buffer 的影响，因此，如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验，推荐使用李记生物的相关产品，参照相关产品推荐。

4.微球使用前应充分振荡均匀。微球应保存在储存溶液中，防止干燥。

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