Anti-Flag琼脂糖凝胶

Anti-Flag琼脂糖凝胶Anti-Flag Affinity Gel可以实现高效快速的抗原分离。免疫沉淀试剂盒配有经过优化预制的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。

订购信息

常温运输。4℃保存，有效期24个月。

技术参数

贴壁细胞样品

1.移去培养基，用PBS洗细胞两次。

2.收集细胞至1.5 mLEP 管内，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80 ℃长期保存）。

培养皿IP Lysis/Wash Buffer推荐使用体积：

悬浮细胞样品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集细胞，弃上清。

2.用PBS 洗细胞一次，即用PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000 g、10 min，收集细胞，弃上清。

3.用预冷的IP Lysis/Wash Buffer重悬细胞。每50 mg 细胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80 ℃长期保存）。

血清样品

　一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50~150 µg/mL，置于冰上备用（或置于-20 ℃长期保存）。

免疫沉淀

【注】：为保证凝胶均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中凝胶。

1.将25 µL的Anti-Flag Affinity Gel加入1.5 mL 离心管中。

2.向凝胶中加入500 µL 预冷PBS，轻柔混匀。

3.将离心管放入离心机中1000rpm，5min收集凝胶到离心管的底部，去除上清。

4.向离心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1 min。将离心管放入离心机中1000rpm，5min收集凝胶到离心管的底部，去除上清。

5.将制备好含有Flag标记蛋白的样品加入装有凝胶的离心管中，保持混匀室温下孵育2-4 h。

6.离心1000rpm，5min收集凝胶，除去未结合的样品，保存以备分析。

7.向离心管中加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀。收集凝胶，弃上清。再重复洗两次。

8.变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。

【注】：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。

低pH洗脱：向离心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管5-10 min。通过离心分离凝胶，保留含有目的抗原的上清。每100 µL洗出液中加入20 µL Neutralization Buffer来中和低pH。

注意事项

1.本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.请勿高速离心、干燥或冷冻凝胶，这些操作会导致凝胶聚集而降低结合能力。

3.IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer的影响，因此，如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验，推荐使用李记生物的相关产品，参照相关产品推荐。

4.微球使用前应充分振荡均匀。微球应保存在储存溶液中，防止干燥。

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