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Evagreen (20 × in water)

简要描述:Evagreen (20 × in water)是一种用于实时定量PCR(qPCR)的DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于SYBR Green I。除了有相似的光谱特性,Evagreen有三个主要特点使它区别于SYBR Green I 。

  • 产品型号:AN19L032
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-08-07
  • 访  问  量:1439

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应用领域环保,化工,生物产业,综合

Evagreen  ( 20 × in water )

产品描述
Evagreen 是一种用于实时定量PCR(qPCR)的DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于SYBR Green I。除了有相似的光谱特性,Evagreen有三个主要特点使它区别于SYBR Green I 。
首先,Evagreen对PCR的抑制性远小于SYBR Green I。因此,使用Evagreen进行的qPCR实验可以使用快速PCR步骤。同时,Evagreen在实验中可以使用较高的浓度,从而获得远强于SYBR Green I扩增信号。较高浓度的Evagreen也消除了“染料重分布"的缺陷,使Evagreen既可用于多重PCR,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲线分析(HRM)。该分析正被越来越多的用于PCR后的基因分型和异源双链分析。由于SYBR Green I对PCR的抑制性,从而要求其使用浓度必须很低,因此SYBR Green I无法解决由低浓度造成的染料重分布问题,既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同时,染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性,因为低熔点的DNA链可能由于这种原因而无法检测到。    
第二,Evagreen的稳定性强。在正常的储存、操作和PCR过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里,也可以反复冻融。与之相反,SYBR Green I不稳定而且降解后对PCR抑制性更强。
第三,Evagreen降低了细胞膜透性,因而比SYBR Green 1更加安全。独立实验室的测试结果显示,Evagreen既没有诱变性也没有细胞毒性。相反,虽然SYBR Green I本身诱变性很弱,但它在细胞中可能抑制了正常DNA的修复机制,使其有诱变增强作用。考虑到PCR的广泛使用,其安全性应该足够重视。
订购信息

产品名称货号规格
Evagreen (20 × in water)AN19L0321 mL
Evagreen (20 × in water)AN19L0335 mL

产品参数
λabs/λem = 500/530 nm (结合DNA)
λabs = 471 nm (未结合DNA)
运输与保存
蓝冰运输。4℃短期避光保存,有效期12个月;-20℃长期避光保存,有效期24个月
使用方法
如下建立实验体系:(仅供参考)

10× 的无Mg2+聚合酶缓冲液5 µL
50 mM MgCl22.5 µL
2 mM dNTP5 µL
20×Evagreen2.5 µL
Taq DNA polymerase1-5 units
F, R Primers0.1-0.5 µM
模板适量
dH2Oto a final volume of 50 µL



实验目的
实时定量PCR检测20× Evagreen
主要试剂
1. Prime
hβ-actin:
forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’
reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’
2. HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
3. Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
4. BSA: Sigma(A7030)
5. 10 mM dNTPs: Takara(4019)
实验方案
1. 配制2× Evagreen Buffer

Evagreen Buffer
组分浓度体积(μL)
1 M Tris HCl pH8.550 mM5
500 mM (NH4)2SO420 mM4
50 mM MgCl27 mM14
50% glycerol2.5%5
DMSO10 %10
20× Evagreen10
10 mM dNTPs0.4 mM4
2 % Tween200.03 %1.5
1 mg/mL BSA22 ug/mL2.2
H2O/44.3
Total volume/100

2. 配制 q-PCR反应体系

成分20 μL/体系/管反应
10 μM primers1 μL
模板适量
HS Taq DNA 酶 (5 U/μL)0.2 μL
Evagreen buffer10 μL
H2O定容至20 μL

注】: DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定合适的 DNA 模板添加量。cDNA作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。引物终浓度一般控制在0.1-0.5 μM范围内。
3. 实验分组:标准对照样品孔(阳性对照)、检测样品孔、空白对照孔(阴性对照)共三组,同时进行检测,分别进行三次平行实验。
4. 混匀离心、上机进行荧光定量PCR(仪器为Roche:LC96)。
PCR程序:


温度时间
Step 195℃2 min
Step 295℃5 sec
Step 360℃30 sec
Step 2~3,重复 45个循环
熔解曲线Tm值 57℃~99℃

5. 保存数据,判断样本质量:
A.检测样品与标准品之间的Ct值差
B.检测样品与标准品之间的荧光强度差
检测结果需达到:以上两组检测指标无显著性差异
注意事项

  1. 产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域

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