详细介绍
品牌 | Life-iLab/李记生物 | 货号 | AS11L021 |
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规格 | 100mL | 供货周期 | 现货 |
应用领域 | 生物产业 |
产品描述
苏木素染色液综合了多种经典的方法配制而成。该溶液无汞,可用于免疫组化复染和H&E染色。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
苏木素染色液 | AS11L021 | 100mL |
运输与保存
常温运输。常温避光保存,有效期12个月。
使用方法
1. 试剂准备
酸酒精:在100mL 70%乙醇中加入1mL 盐酸,室温保存。注:冰冻切片后,各种步骤(干燥,乙醇或甲醇固定,热固定,使用带电的或有粘性的盖片)保证组织切片在染色过程中不脱落。
2. 95%乙醇:在HE染色开始前,组织切片需要固定并水化。将切片置于95%乙醇中约2min,开始水化并固定组织。注:跳过使用95%乙醇对组织进行水化和固定,并不影响形态学上的细节。
3. 水化:进一步对组织切片进行水化3-5min,并冲掉前一步残留的乙醇。
4. 苏木素:水化后,组织切片用苏木素染色1-3min,可根据染色结果和要求调整染色时间。苏木素是一种基本染料,可以对细胞的酸性成分进行染色,包括核酸、粘多糖、酸性糖蛋白,将他们染成蓝色或蓝紫色。注:没有苏木素,伊红会将组织染成亮粉红色;显而易见的是缺乏细胞核。组织结构很难区分,细胞内成分几乎都不存在,难以辨别。针对上述问题,可以使用苏木素进行复染。
(1) 染色较弱是由于:自身溶解或者固定不好;过度脱钙;染色时间不足;过度脱色(酸与醇的比例过高或者酸乙醇脱色时间过长);苏木素的作用较弱(苏木素氧化过度(过老)或水稀释过度);漂洗溶液的污染;切片过薄;乙醇的去除或者染色前水的漂洗不充分。
(2) 染色过度是由于:组织切片干燥;苏木素浓度过高;染色时间过长;载玻片粘合剂过多;脱色过弱或时间不足;切片过厚;热暴露的时间过长。
5. 水洗:苏木素染色后,用水洗组织是非常重要的。这一步以及随后的水洗,可将多余的染料,媒染剂等去除。适当的漂洗可以去除表面金属光泽,金属光泽可阻止苏木素的染色。注:跳过此步,将产生不好的结果,例如沉淀的形成,染液的稀释,表面金属光泽的存在。
6. 酸酒精:酸酒精分色剂3-5s。在苏木素染色方法中,组织切片有意过度染色,酸酒精将去除多余的染料以及玻片上的背景染色。
注:若省略此步骤,切片将呈暗紫色,嗜酸性结构(如胶原)不会显现出明亮的粉红色,导致组织结构之间难以区分,从而影响对切片的准确判断。另外,分色过度可能是由于:酸浓度过高;脱色时间过长等。分色不足是由于:酸浓度过低;脱色时间不足;在切片上有多余的蛋白或者明胶等。
7. 水洗:水洗30s,终止酸酒精反应,进一步阻止酸酒精从组织切片上将大量苏木素去除。注:如果切片没有经过漂洗,酸酒精可以过度脱色。如果不去除脱色剂,酸酒精将持续从组织切片上去除苏木素。
8. 自来水冲洗或用蓝化液蓝化:自来水冲洗3-5min,可起到发蓝处理,将紫红色的苏木素转变为蓝紫色。通常,发蓝试剂是pH依赖性的,由碱性溶液构成。因此,如果自来水作为发蓝试剂,pH值的每天监控是非常重要的,因为自来水的pH值可能每天都会波动。或用蓝化液蓝化,30s-1min;流动的自来水冲洗5min;注:跳过发蓝试剂步骤,将会导致苏木素染液的颜色发生微妙的变化,难以区分。代替深蓝色,细胞核将呈现紫色,有时甚至是红色。细胞核不可过度蓝染。如果组织染色过蓝,一般是在组织切片上苏木素过多所致。
9. 水洗:为伊红复染做准备,通过水洗30sec,将多余的发蓝试剂去除。因为在碱性环境下,伊红无法染色,水洗去除发蓝试剂将允许伊红保持其酸性pH值,使伊红得以均匀复染。注:发蓝试剂之后,如果没有水洗,组织切片无法正确使用伊红染色。因此,酸性结构将被染为苍白色并且不均匀,进而导致错误的判断。
10. 伊红:为了正确区分胞内结构,伊红是出色的苏木素复染剂。伊红复染30-60s,可根据染色结果和要求调整染色时间。伊红是酸性染料,可染细胞质,尤其是线粒体、分泌颗粒和胶原。它可以区分细胞内不同的细胞器以及不同的结缔组织。注:使用伊红复染组织切片的失败,将导致组织切片的低分化。
(1) 染色较弱是由于:组织切片过薄;染色时间不足;随后95%酒精分化过度。
(2) 染色过度是由于:染液浓度较高(可能是由于过度蒸发);组织切片过厚;染色时间过长;随后95%酒精分化不足。
(3) 伊红染色未分化(一种颜色)是由于:固定不*底;过度染色(染色时间过长或染液浓度过高)。
11. 95%乙醇:95%乙醇处理2s-1min,根据染色结果和要求调整;伊红分化将产生不同的粉色。注:如果95%乙醇被稀释(例如,从前一步染色中携带了伊红),分化的效果较差。
12. 100%乙醇:通过100%乙醇使组织切片脱色。100%乙醇处理1min;再用新的100%乙醇处理1min。注:这一步很难引起注意,若无95%乙醇,难以区分酸性结构,组织切片成为粉色。若无100%乙醇脱水,组织切片不能脱水,导致在盖片下形成水珠。这些水珠可与下一步的二甲苯结合而形成白色混浊物,这将影响组织切片的质量。
13. 二甲苯:二甲苯处理5min。在充分脱水后,二甲苯可将组织切片上的酒精去除。去除酒精后,在载玻片上加盖玻片时,二甲苯也可作为包埋剂确保可溶解。由于有潜在的毒性,二甲苯替代品,例如柠檬烯、环烷烃也可使用。替代品可提供相同的组织染色质量,并且他们使用更安全,操作更简单。注:当跳过此步骤时,不使用二甲苯透明,酒精将会保存于组织切片上,导致伊红从切片上流出。
14. 封片:中性树胶封片,自然风干或烤干,显微镜观察。
染色结果:细胞核染为蓝色;细胞质染为红色。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 试剂应保存于阴凉、干燥、通风良好的环境中。
4. 本产品可与伊红染色液(货号:AS11L031)配合使用。
5. 第一次使用本产品时建议先取1-2个样品做预实验。
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伊红染色液(货号:AS11L031)
本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
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