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外泌体分离试剂盒(SEC法)

简要描述:外泌体分离试剂盒(SEC法)基于分子排阻色谱原理(SEC法),通过分子大小差异实现外泌体分离,具有操作简便、高纯度和高回收率的优点,特别适用于大体积样本的外泌体分离。分离的外泌体可用于 WB 分析、NTA 或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究及细胞和动物实验中的功能研究。本试剂盒常用于细胞培养上清、尿液等大体积样本,也适用于血清、血浆等样本。

  • 产品型号:AC25L434
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-11-26
  • 访  问  量:61

详细介绍

品牌Life-iLab/李记生物货号AC25L434
规格4T供货周期现货
应用领域生物产业

产品描述

本试剂盒基于分子排阻色谱原理(SEC法),通过分子大小差异实现外泌体分离,具有操作简便、高纯度和高回收率的优点,特别适用于大体积样本的外泌体分离。分离的外泌体可用于 WB 分析、NTA 或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究及细胞和动物实验中的功能研究。本试剂盒常用于细胞培养上清、尿液等大体积样本,也适用于血清、血浆等样本。

订购信息

产品名称

货号

规格

外泌体分离试剂盒(SEC法)

AC25L434

4T

产品组分

组分

4T

保存条件

A. Exosome Purification Column(10mL)

4个

4°C

B. Column Adapter(10mL)

4个

常温

运输与保存

常温运输。组分A在4℃保存,组分B常温保存,有效期12个月。

使用方法

自备仪器、试剂与耗材:高速冷冻离心机、离心管、超滤管(MWCO:50 kDa)、PBS(现配现用,0.2um 过滤,超声或真空脱气)、20%乙醇(现配现用,0.2um 过滤,超声或真空脱气)、纯化柱固定器(自行购买或者合适的固定试管铁架台,以避免操作过程中发生晃动)

1.    样品预处理

(1)       去除细胞:将样品在 4℃、300g 离心 5 min,转移上清至新离心管;无细胞样本可跳过此步骤。

(2)       去除细胞及碎片:4℃、2,000g 离心 10 min,转移上清至新离心管。

(3)       去除大体积颗粒:步骤 (2)得到的上清,在 4℃、14,000g 下离心 30 min,转移上清至新离心管。

2.    纯化柱预处理

(1)   将外泌体纯化柱(Exosome Purification Column(10mL))安装在纯化柱固定器上,下方放置废液槽。让纯化柱在室温(18-25℃)平衡至少 30 min;温度过低或过高会影响分离效果。

(2)   检查纯化柱下端是否充满液体,如无空气可跳过此步骤;若有空气,将纯化柱倒置,打开下端密封帽,用移液器或注射器注入水或 20% 乙醇顶出空气,使密封帽中充满液体后重新盖上,并放回固定器。

(3)   打开纯化柱顶盖,再打开下端密封帽,弃去封柱液(可倒掉或用移液器吸出),将纯化柱适配器(Column Adapter (10 mL))连接到纯化柱,从顶部加入 2 倍柱体积(20 mL)PBS 进行平衡,至下端无溶液流出。清洗过程中确保顶部筛板始终保持湿润。完成后,盖上底端密封帽,断开适配器,并加入 1 mL PBS 备用。

注:

①    每次操作前应先打开纯化柱上盖,再打开下端密封帽,以避免空气进入,影响分离效果。

②    分离过程中确保纯化柱顶部筛板始终湿润,以保持最佳分离效果。

③    向纯化柱中加入大体积溶液时,可将适配器连接到纯化柱,将溶液加入到适配器中。

④    PBS 建议新鲜配制并通过 0.2 μm 滤膜过滤,或使用商业的无菌 PBS 以防微生物或颗粒污染。PBS使用前必须平衡至室温,以避免纯化柱中出现气泡影响分离效果。

3.    分离外泌体

(1)   样品上样:移除纯化柱中的 PBS,在上方加入 1 mL 样本;如样本不足 1 mL,可用 PBS 补至 1 mL,混匀后上样。取下纯化柱底部密封帽,待样本全部进入纯化柱后再加 PBS。

注:

①    如样本体积超过 1 mL,建议用 50 kDa 超滤管将样本浓缩至 1 mL,浓缩倍数不超过 20 倍(具体操作见超滤管使用说明书)。

②    对于高粘度样本(如血浆、血清、高粘度胸腹水等),可取 0.5 mL 样本用 PBS 稀释至 1 mL,混匀后上样。

③    待样品进入筛板后再加入 PBS,以避免样品被稀释影响分离效果。

(2)   外泌体分离:在纯化柱下方放置 1.5 mL 离心管,向上方加入 0.5 mL PBS,待下方收集到 0.5 mL 馏分后,继续加入 0.5 mL PBS,并更换新的 1.5 mL 离心管收集。按流出顺序标记各馏分管编号。

(3)   外泌体收集:收集 4、5、6、7、8 号馏分管以获得外泌体,其中 5、6、7 号馏分管的外泌体浓度更高。可直接对收集液测定外泌体颗粒数和蛋白浓度。

(4)   外泌体浓缩:测定外泌体颗粒浓度和蛋白浓度后,根据后续实验需求,可选择是否进行浓缩。如需浓缩,建议使用 MWCO 50 kDa 的超滤管,在 4,000g 离心至所需体积即可。

4.    纯化柱维护

(1)   收集所有馏分后,将适配器连接至纯化柱,从顶部加入至少 2 倍柱体积(20 mL)PBS清洗纯化柱,至下方无溶液流出。

(2)   继续加入 1.5 倍柱体积(15 mL)20% 乙醇清洗,至下方无溶液流出。

(3)   最后,取下适配器,向纯化柱中加入 3 mL 20% 乙醇封闭液,安装纯化柱顶盖,并在密封帽中填满 20% 乙醇,盖到纯化柱下端出口,于 4℃直立保存。

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 新购买或使用后的纯化柱,上筛板和白色琼脂糖微球之间可能会出现一定的空隙,这是储存和使用过程中凝胶沉降造成的,并不影响纯化柱的性能,将上筛板向下推至无空隙即可正常使用。

4. 本试剂盒常用于细胞培养上清、尿液等大体积样本,也适用于血清、血浆等样本。其他微量珍贵样本,请向本公司技术人员咨询。

5. 纯化柱保存在封闭液中,封闭液为 20%乙醇。20%乙醇建议现配现用,同时经 0.2um 滤膜过滤、超声或真空脱气,避免造成纯化柱出现大量气泡,影响分离效果。

6. 每次纯化柱使用前需要使用无菌并平衡至室温的 PBS 清洗。PBS建议现配现用,同时经 0.2um 滤膜过滤、超声或真空脱气,避免造成纯化柱出现大量气泡,影响分离效果。

7. 纯化柱中间不能有气泡,使用前后需认真检查,避免影响实验。

8. 纯化柱可以反复利用,但是多次使用会影响效果,建议重复使用不超过5次。

9. 当分离的外泌体进行 NGS 或者其他组学分析时,为避免交叉污染,建议每个样品使用一支新的纯化柱。

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本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。


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