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品牌 | Life-iLab/李记生物 | 货号 | AC25L434 |
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规格 | 4T | 供货周期 | 现货 |
应用领域 | 生物产业 |
产品描述
本试剂盒基于分子排阻色谱原理(SEC法),通过分子大小差异实现外泌体分离,具有操作简便、高纯度和高回收率的优点,特别适用于大体积样本的外泌体分离。分离的外泌体可用于 WB 分析、NTA 或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究及细胞和动物实验中的功能研究。本试剂盒常用于细胞培养上清、尿液等大体积样本,也适用于血清、血浆等样本。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
外泌体分离试剂盒(SEC法) | AC25L434 | 4T |
产品组分
组分 | 4T | 保存条件 |
A. Exosome Purification Column(10mL) | 4个 | 4°C |
B. Column Adapter(10mL) | 4个 | 常温 |
运输与保存
常温运输。组分A在4℃保存,组分B常温保存,有效期12个月。
使用方法
自备仪器、试剂与耗材:高速冷冻离心机、离心管、超滤管(MWCO:50 kDa)、PBS(现配现用,0.2um 过滤,超声或真空脱气)、20%乙醇(现配现用,0.2um 过滤,超声或真空脱气)、纯化柱固定器(自行购买或者合适的固定试管铁架台,以避免操作过程中发生晃动)
1. 样品预处理
(1) 去除细胞:将样品在 4℃、300g 离心 5 min,转移上清至新离心管;无细胞样本可跳过此步骤。
(2) 去除细胞及碎片:4℃、2,000g 离心 10 min,转移上清至新离心管。
(3) 去除大体积颗粒:步骤 (2)得到的上清,在 4℃、14,000g 下离心 30 min,转移上清至新离心管。
2. 纯化柱预处理
(1) 将外泌体纯化柱(Exosome Purification Column(10mL))安装在纯化柱固定器上,下方放置废液槽。让纯化柱在室温(18-25℃)平衡至少 30 min;温度过低或过高会影响分离效果。
(2) 检查纯化柱下端是否充满液体,如无空气可跳过此步骤;若有空气,将纯化柱倒置,打开下端密封帽,用移液器或注射器注入水或 20% 乙醇顶出空气,使密封帽中充满液体后重新盖上,并放回固定器。
(3) 打开纯化柱顶盖,再打开下端密封帽,弃去封柱液(可倒掉或用移液器吸出),将纯化柱适配器(Column Adapter (10 mL))连接到纯化柱,从顶部加入 2 倍柱体积(20 mL)PBS 进行平衡,至下端无溶液流出。清洗过程中确保顶部筛板始终保持湿润。完成后,盖上底端密封帽,断开适配器,并加入 1 mL PBS 备用。
注:
① 每次操作前应先打开纯化柱上盖,再打开下端密封帽,以避免空气进入,影响分离效果。
② 分离过程中确保纯化柱顶部筛板始终湿润,以保持最佳分离效果。
③ 向纯化柱中加入大体积溶液时,可将适配器连接到纯化柱,将溶液加入到适配器中。
④ PBS 建议新鲜配制并通过 0.2 μm 滤膜过滤,或使用商业的无菌 PBS 以防微生物或颗粒污染。PBS使用前必须平衡至室温,以避免纯化柱中出现气泡影响分离效果。
3. 分离外泌体
(1) 样品上样:移除纯化柱中的 PBS,在上方加入 1 mL 样本;如样本不足 1 mL,可用 PBS 补至 1 mL,混匀后上样。取下纯化柱底部密封帽,待样本全部进入纯化柱后再加 PBS。
注:
① 如样本体积超过 1 mL,建议用 50 kDa 超滤管将样本浓缩至 1 mL,浓缩倍数不超过 20 倍(具体操作见超滤管使用说明书)。
② 对于高粘度样本(如血浆、血清、高粘度胸腹水等),可取 0.5 mL 样本用 PBS 稀释至 1 mL,混匀后上样。
③ 待样品进入筛板后再加入 PBS,以避免样品被稀释影响分离效果。
(2) 外泌体分离:在纯化柱下方放置 1.5 mL 离心管,向上方加入 0.5 mL PBS,待下方收集到 0.5 mL 馏分后,继续加入 0.5 mL PBS,并更换新的 1.5 mL 离心管收集。按流出顺序标记各馏分管编号。
(3) 外泌体收集:收集 4、5、6、7、8 号馏分管以获得外泌体,其中 5、6、7 号馏分管的外泌体浓度更高。可直接对收集液测定外泌体颗粒数和蛋白浓度。
(4) 外泌体浓缩:测定外泌体颗粒浓度和蛋白浓度后,根据后续实验需求,可选择是否进行浓缩。如需浓缩,建议使用 MWCO 50 kDa 的超滤管,在 4,000g 离心至所需体积即可。
4. 纯化柱维护
(1) 收集所有馏分后,将适配器连接至纯化柱,从顶部加入至少 2 倍柱体积(20 mL)PBS清洗纯化柱,至下方无溶液流出。
(2) 继续加入 1.5 倍柱体积(15 mL)20% 乙醇清洗,至下方无溶液流出。
(3) 最后,取下适配器,向纯化柱中加入 3 mL 20% 乙醇封闭液,安装纯化柱顶盖,并在密封帽中填满 20% 乙醇,盖到纯化柱下端出口,于 4℃直立保存。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 新购买或使用后的纯化柱,上筛板和白色琼脂糖微球之间可能会出现一定的空隙,这是储存和使用过程中凝胶沉降造成的,并不影响纯化柱的性能,将上筛板向下推至无空隙即可正常使用。
4. 本试剂盒常用于细胞培养上清、尿液等大体积样本,也适用于血清、血浆等样本。其他微量珍贵样本,请向本公司技术人员咨询。
5. 纯化柱保存在封闭液中,封闭液为 20%乙醇。20%乙醇建议现配现用,同时经 0.2um 滤膜过滤、超声或真空脱气,避免造成纯化柱出现大量气泡,影响分离效果。
6. 每次纯化柱使用前需要使用无菌并平衡至室温的 PBS 清洗。PBS建议现配现用,同时经 0.2um 滤膜过滤、超声或真空脱气,避免造成纯化柱出现大量气泡,影响分离效果。
7. 纯化柱中间不能有气泡,使用前后需认真检查,避免影响实验。
8. 纯化柱可以反复利用,但是多次使用会影响效果,建议重复使用不超过5次。
9. 当分离的外泌体进行 NGS 或者其他组学分析时,为避免交叉污染,建议每个样品使用一支新的纯化柱。
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本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
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