胶原酶Ⅱ型

产品描述

 胶原酶(Collagenase)是从溶组织梭菌（Clostridium histolyticum）提取的一种酶粗提物，也叫梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A），不仅含有胶原酶，还含有其他几种不同酶的混合物，它们共同作用分离细胞/组织。这种“粗"胶原酶，优先降解天然胶原蛋白中的螺旋区域，并且能够在三螺旋区域内进行多次切割，切割Pro-Y-Gly-Pro序列（常见于胶原蛋白，是动物细胞外结缔组织的主要纤维成分） 中的 Y-Gly 键，其中 Y 最常见的是中性氨基酸。胶原酶消化作用相对胰蛋白酶温和，在生理温度和 pH 值条件下具有良好的解离能力，无需机械搅拌。

 目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：(1)胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备。(2)胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备。(3)胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备。(4)胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰蛋白酶活性，通常用于胰腺的胰岛细胞的制备，或者需要维持膜蛋白或受体完整性的细胞制备实验。

订购信息

运输与保存

 蓝冰运输，4℃保存。有效期12个月。

使用方法

1.       胶原酶储存液的配制

向每管100 mg的胶原酶中加入100 μL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成1 g/mL（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于 -20℃ 避光冻存。

使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5~2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1~2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。【注】：II型胶原酶的活性≥125 U/mg solid。

2.       组织的分离

(1)     使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3~4 mm大小的组织块。

(2)     利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗涤组织块数次。

(3)     加入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度。

(4)     于37℃ 孵育4~18 h （孵育时间根据组织类型的不同而变化）。消化时使用水平摇床以及用3mM的CaCl₂补充消化可以提高消化效率。

(5)     已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完*解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃ 继续孵育。

(6)     利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次。

(7)     细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

(8)     于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3.       器官灌注

(1)     向37℃ 预热的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl₂有助于提高分离效率。

(2)     按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液。

(3)     将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃ 进一步孵育。

(4)     利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次。

(5)     细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

(6)     于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2. 本产品仅作为试剂原料提供，具体使用方法请参考相关文献资料进行确定。

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