技术文章_第(34)页－和元李记（上海）生物技术有限公司

蛋白酶K具有广泛的底物特异性
2019-12-27 蛋白酶K具有广泛的底物特异性。即便存在洗涤剂的情况下，其仍可降解许多非变性状态的蛋白质。蛋白酶K分离自一种可在角质上生长的真菌白色侧齿霉菌(Engyodontiumalbum)（前称腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能够降解非变性状态的角质（头发），因而称为“蛋白酶K”。1其切割的主要位点为带有封闭氨基基团、邻近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽键。因其广泛的特异性，其较为常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相对分子量约为29.3kDa,是一种切割...
如何提取外泌体？都有哪些方法？
2019-11-26 外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载...
如何解决胎牛血清使用中遇到的问题？
2019-11-15 如何储存和解冻胎牛血清才不会使产品质量受损?将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。按如下操作可避免沉...
PicoGreen荧光染料可对DNA样品进行定量
2019-09-10 PicoGreen荧光染料法是一种灵敏的双链DNA检测方式，通过Modulus检测仪可以检测到pg级的微量DNA。这种方法主要用来测定微量的DNA残留，或对DNA样品进行定量。作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地与样品中双链DNA结合，产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度或相对荧光单位（RFU）的显著增加。其自发荧光忽略不计，重复性标准差异低，不受样品化学成分的干扰。Picogree...
擦亮眼睛：选购胎牛血清要注意这些问题
2019-04-22 市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨胎牛血清质量的优劣。选购胎牛血清请注意以下几点：一、外观拿到胎牛血清，先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要1、颜色根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。国产血清的采血点很分散，...
外泌体可以来了解一下
2018-12-07 外泌体的提取主要包括以下几种方式，一是超速离心法，这是目前外泌体提取常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。四是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不...
EZ ECL Femto化学发光液（飞克级）
2018-11-13 使用方法1)取出印记膜，加入合适的封闭液在温室下孵育20-60分钟，同时振荡，以封闭膜上非特异性蛋白结合位点。2)将膜从封闭液中取出，与一抗工作液在温室孵育1小时，同时振荡；或在28℃孵育过夜，不振荡。3)将足量的洗涤缓冲液加至膜上，保证缓冲液将膜*覆盖。振荡孵育≥5分钟，更换洗涤缓冲液并重复该步骤4-6次。增加洗涤缓冲液体积，洗涤次数和洗涤时间有助于降低背景信号。注：1）孵育前，膜在洗涤缓冲液中的短暂淋洗会提高洗涤效率；2）按前文建议的HRP标记二抗稀释度非常重要的。4)将...
看东看西还不如看线粒体染色试剂盒的这篇内容
2018-10-25 线粒体染色试剂盒使用一种专属染料，选择性地在不同膜电位的线粒体中积累。这种线粒体指示剂是一种疏水性复合物，可以轻易地渗透进入活细胞中，且当进入细胞后就被锁定在线粒体中。这种荧光性线粒体指示剂可以在线粒体中保留很长时间，因为该指示剂带有能定位于细胞的基团。其关键特征是其染色效率显著性提高，本标记方法十分稳定，需要亲手操作的地方很少。它可以用于许多荧光研究中，例如微孔板分析，免疫组化和流式细胞术。它也可以用于多种不同类型的研究中，包括细胞粘附性、趋化性、多药物抗性、细胞活性、细胞...

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