Bradford蛋白定量试剂盒

产品描述
　　Bradford 法蛋白定量是基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。
订购信息

产品组分

保存方法
　　冰袋运输，Bradford试剂A 2-8°C保存，蛋白标准品-20°C保存，保质期一年。
使用方法
方案一、试管检测
1、试剂准备
（1）取适量5mg/ml蛋白标准，PBS稀释至终浓度为2mg/ml蛋白标准。配制后可立即使用，也可以-20°C长期保存。
（2）稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
表1：BSA标准品配制表

（3）取干净的试管，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
（4）取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个样品做2-3 个平行反应。
2、样品孵育及检测
（1）向上一步骤配制的不同浓度的标准品BSA和待测样品试管中各加入1.5ml Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，室温放置10分钟。
（2）用分光光度计测定595nm 处的吸光值。
3、制作标准曲线和计算样品浓度
（1）利用Excel或其他软件绘制标准曲线，并计算样品中的蛋白浓度。
（2）如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
方案二、微孔检测
1、试剂准备
（1）将按表2稀释好的BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个样品做2-3 个平行反应。
表2：BSA标准品配制表

2、样品孵育及检测
（1）每孔加入250μl Bradford蛋白定量试剂，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10 分钟。
（2）用酶标仪测定595nm处的吸光值。
3、制作标准曲线和计算样品浓度
（1）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
（2）如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
注意事项
1、样品中若含有去垢剂会影响检测结果，请试用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒；
2、要得到更为准确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线；
3、需准备 37°C水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 465-595nm 之间，595nm合适。酶标仪需与 96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。