EdU细胞增殖流式检测试剂盒

产品描述
细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)掺入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与荧光染料的特异性共轭反应，把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面，这样可以进行高效快速的检测出DNA复制活性，此技术广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复等方面的研究。
传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性、抗原修复、抗原抗体过夜孵育等复杂繁琐的操作步骤。而EdU检测方法不需要剧烈的DNA变性，只需温和的细胞固定化和透化处理，能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点，操作步骤更加快速、灵敏和准确。EdU与胸腺嘧啶(T)结构非常相似，大小却只有BrdU抗体的1/500，很容易在细胞内扩散；无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更快速便捷地反映DNA复制活性。
订购信息

产品组分

运输与保存
常温运输。4℃保存，有效期12个月。
使用方法
细胞培养
将细胞接种于孔板中（以下溶液加入量是以6孔板为例），培养至正常生长阶段。
药物处理
根据实验需要进行各种细胞处理。
EdU标记
1.设置1个不加EdU标记培养基的NC对照组，以便进行流式检测数据的背景分析。
2.将细胞培养基与EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU标记培养基。
3.提前将2×EdU标记培养基预热，然后将500微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得6孔板中每孔1ml 1×EdU溶液。
【注】：①不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度；②配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。
4.孵育细胞2 h，弃培养基。
【注】：①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态；②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2 h的孵育时间。
5.将细胞收集至流式管中，1000rpm 离心5 min，用枪头吸弃上清。
【注】：①如贴壁细胞，请先消化收集；②离心转速可按特定细胞培养经验进行设置。
6.以1×PBS清洗细胞，1000rpm 离心5 min，用枪头吸弃上清。
细胞的固定和通透
1.每管加入1mL 4%多聚甲醛细胞固定液固定15-30 min，1000rpm 离心5 min，弃固定液。
2.每管加入2mL 2mg/mL 甘xx，摇床孵育5 min，以中和过量的多聚甲醛。
3.1000rpm 离心5 min，弃甘xx溶液，每管加入2mL PBS洗液清洗，1000rpm 离心5 min，弃上清。
4.每管加入1mL 0.5% Triton X-100细胞通透液，室温通透10 min，1000rpm 离心5 min，弃细胞通透溶液。
5.每管加入2mL PBS洗液，室温清洗5 min，1000rpm 离心5 min，吸弃上清。
EDU染色
1.通过用10：1去离子水稀释反应缓冲液，进行配制1×反应缓冲液。
2.按照溶解 200 mg缓冲添加剂溶于1 mL去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解，即为可用的缓冲添加剂的浓度，建议现用现配。
【注】：缓冲添加剂为白色粉末，较难准确称量，称量范围可稍微放宽，但是不应超过±20%，且该粉末较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。
3.按照以下的表格进行染色反应液的配制：

4.每管加入配置好的检测混合液，体积以覆盖细胞为宜，充分重悬细胞，避光、室温孵育10-30 min。
5.1000rpm 离心5 min，吸弃染色反应液，每管加入2mL 0.5% Triton X-100细胞渗透液清洗2次，每次10 min；离心弃细胞渗透液，用500uL PBS重悬细胞。
DNA染色
1.将Hoechst 33342 *超级纯*(李记货号：AC12L021)用PBS溶液1:1000进行稀释得到1×Hoechst染色液。
2.每管加入1×Hoechst染色液，以覆盖细胞为宜，室温避光孵育10-15 min后，弃染色液。
3.加入500 μL PBS重悬细胞。
其它染色（自备）
（可选）可以根据实验需要进行细胞表面或细胞内抗原的抗体染色。染色完的样品上机检测时，根据使用的染料选择合适的通道检测。
流式检测及分析
1.建议染色完成后立即进行流式检测；如果条件限制，请于4℃条件下避光湿润保存3 d之内完成检测。
2.检测细胞数量建议尽量能达到10⁷级，若细胞数量较少，检测的细胞数量可调整为10⁶起始进行实验。

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。