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细胞冻存液原理及配制方法
2022-04-22 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻...
PEI转染试剂是非常有潜力的非病毒质粒载体试剂
2022-03-28 分子生物学的发展使得大量致病基因被鉴定，科学家在这些研究成果的基础上发展了基因治疗。基因治疗是利用基因载体将治疗基因导入患者体内，进而表达功能蛋白以达到治疗的目的。基因治疗传递DNA面临的挑战之一是外源治疗基因会被体液和胞外空间的核酸内切酶降解。治疗基因在目标组织中的选择性积累、细胞内化以及从溶酶体逃逸这些问题对所有核酸治疗剂都是需要克服的。DNA必须输送至细胞核以允许获得转录和表达。因此，设计和制备安全高效的基因载体来压缩并且保护治疗基因以免被核酸内切酶降解并延长其在体内的...
基因组DNA提取原理说明
2022-03-24 DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象。所以基因组DNA提取实验是分子生物学最基本实验之一。今天若重介绍基因组DNA提取的原理。在接下来的时间了还会介绍动物基因组DNA的提取步骤。DNA.RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L.DNA在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细...
蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶
2022-03-21 蛋白酶，顾名思义，降解蛋白的酶，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。在RNA提取中，蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶，防止RNA的降解。蛋白酶K广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面。一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。一般储存在-20°C，避光防潮密闭干燥蛋白酶是所有能够催化分解蛋白质的酶类的统称蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌中纯化得到。该酶...
介绍牛血清白蛋白常见的问题解决方法
2022-01-21 牛血清白蛋白一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保护或载体作用，不少酶类添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。对多数底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可实现重复切割。在37℃，酶切反应超过1h时，牛血清白蛋白可以使酶更加稳定，因为在不含牛血清白蛋白的反应缓冲液中，许多限制性内切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限...
外泌体通过分子信息传递扮演着重要的角色
2022-01-07 外泌体作为疾病诊断标志物的潜在应用依赖于基于外泌体的药物递送系统的技术突破，要将其用于临床治疗，外泌体的大规模工业化生产面临很大的挑战。外泌体（exosome）是细胞分泌囊泡（extracellularvesicles）的一种亚型，存在于生物体液中，并参与多种生理和病理过程。外泌体被认为是细胞间通信的一种新机制，允许细胞交换蛋白质、脂质和遗传物质。过去，细胞分泌的外泌体一度被认为只是参与废物排泄；现在，随着高通量蛋白质组学和基因组学的发展，外泌体被广泛认为是生物体内细胞间短距...
介绍细胞凋亡形态学的几种检测方法
2021-11-28 细胞凋亡与坏死是两种*不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1、光学显微镜和倒置显微镜（1）未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。（2）染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、...
外泌体的提取主要包括以下几种方式
2021-11-25 外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载...

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